W:Frate, transcrierea inversă este finalizată și, în sfârșit, ultimul pas – PCR cantitativ fluorescent!Hei, frate, ce este PCR cantitativ în timp real?
M:PCR știi mereu, nu?
W: Știi, PCR este reacția în lanț a polimerazei și este o tehnologie care crește ADN-ul!
M: Este aproape... Este o metodă tehnică de a amplifica secvența țintă de mai mult de un milion de ori prin primeri specifici, dar aceasta indică doar prezența sau absența secvenței țintă și nu poate determina cantitatea de șablon inițial.PCR cantitativ cu fluorescență este o metodă tehnică dezvoltată pentru a rezolva această problemă.PCR în timp real și PCR de cantitate (qPCR) se referă în general la aceasta.
W: Diferența față de PCR obișnuită constă în cuantificarea fluorescenței?
M:Da, adică în etapa de extindere a fiecărui ciclu PCR, este detectată intensitatea semnalului de fluorescență, iar cantitatea inițială a șablonului poate fi calculată în funcție de modificarea intensității semnalului.
W: Se simte atât de complicat!Trebuie să calculez asta singur?
M: Acest lucru necesită să înveți încet, cel mai bine este să poți înțelege principiul.Acum vă puteți concentra mai întâi asupra valorii CT, care sunt date experimentale relativ intuitive, iar dimensiunea acesteia corespunde mărimii cantității inițiale de șablon.Există, de asemenea, grafice precum curbele de amplificare și curbe de topire.Ei au ultimul cuvânt cu privire la succes sau nu.
W:O, frate.Atunci o să fac experimentul qPCR!
M: Acordați o atenție deosebită să nu adăugați șabloane în zona de reactiv, altfel amestecul dvs. neutilizat va fi ușor contaminat!
W: Am înțeles!

Kit PCR în timp real Easyᵀᴹ-SYBR Green I

Eficiență mai mare, specificitate mai mare
Sensibilitate ridicată, compatibilitate bună