Recent, am descoperit ceva uimitor!Mulți profesioniști avansați în experimente din jurul lui nici măcar nu știu câteva puncte de cunoștințe experimentale foarte de bază.

De exemplu, puteți răspunde la următoarele întrebări?

Există o diferență între OD260 și A260?Ce înseamnă fiecare?
OD este abrevierea densității optice (densitatea optică), A este abrevierea absorbanței (absorbanța), cele două concepte sunt de fapt aceleași, „densitatea optică” este „absorbanța”, dar „densitatea optică” este în conformitate cu majoritatea standardelor naționale și mai standardizată.

De obicei, măsuram valoarea OD la 260 nm pentru a calcula concentrația de acid nucleic, deci ce reprezintă 1OD?
Acidul nucleic are un vârf maxim de absorbție la o lungime de undă de 260 nm, care conține atât ADN, cât și ARN, precum și fragmente fragmentate de acid nucleic (acesta este punctul cheie).
Valoarea OD măsurată la o lungime de undă de 260 nm a fost înregistrată ca OD260.Dacă proba este pură, valoarea OD260 poate calcula concentrația probei de acid nucleic.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (ADN dublu catenar)
=37 μg/ml ssDNA (ADN monocatenar)
=40 μg/ml ARN
=30 μg/ml dNTPs (oligonucleotide)
Există vreo legătură și diferență între RT-PCR, Realtime-PCR și QPCR?
RT-PCR este prescurtarea pentru Reverse Transcription PCR
Real Time PCR=qPCR, prescurtare pentru Quantitative Real Time PCR
Deși PCR în timp real (PCR cantitativ fluorescent în timp real) și PCR cu transcripție inversă (PCR cu transcripție inversă) par să fie ambele abreviate ca RT-PCR.Dar convenția internațională este: RT-PCR se referă în mod specific la PCR cu transcripție inversă.

Care sunt nt, bp și kb utilizate în mod obișnuit pentru a descrie lungimea ADN/ARN în biologie?
nt = nucleotidă
bp = pereche de baze pereche de baze
kb = kilobază

Desigur, ai spune că multor oameni nu le pasă de aceste mici detalii!Toată lumea face asta și nimeni nu te va întreba ce este.Știi că acest lucru este inutil, nu?

Nu, nu, nu, este foarte necesar să știi asta!din cauza careia?
Pentru că vrei să postezi un articol!Frate!Fie că țintiți la absolvire sau urmăriți realizări în cercetarea științifică, trebuie să vă bazați pe articole pentru a vorbi!

Extracția acidului nucleic ar trebui să fie experimentul cel mai simplu și de bază.Calitatea extracției acidului nucleic determină în mod direct rezultatele experimentelor ulterioare.

Deși am spus-o de multe ori, sunt încă mulți prieteni cărora nu le pasă.De data aceasta m-am hotarat sa ma mut din articol!

Informații minime pentru publicarea experimentelor PCR cantitative în timp real, denumite MIQE, este un set de ghiduri pentru experimente cantitative de fluorescență lansate la nivel internațional, care propune standarde minime pentru informațiile experimentale necesare pentru evaluarea experimentelor PCR cantitative cu fluorescență și pentru publicarea de articole.Prin condițiile experimentale și metodele de analiză oferite de experimentator, recenzenții pot evalua mai bine validitatea schemei experimentale a cercetătorului.

Se poate observa că în secțiunea de extracție a acidului nucleic au fost propuse următoarele elemente de detecție:

„E” indică informațiile care trebuie furnizate, iar „D” indică informațiile care ar trebui furnizate dacă este necesar.

Forma este foarte complicată, de fapt, vreau să spun că toată lumea trebuie să plece de la

puritatea (D), randamentul (D), integritatea (E) și consistența (E) pentru a evalua acizii nucleici în aceste patru aspecte.

Conform obiceiurilor experimentale, mai întâi vorbiți despre metodele de evaluare a purității și concentrației.

Măsurarea OD este metoda de detectare preferată și cea mai ușoară pentru experimentatori.Cât despre principiu, nu voi intra în detalii aici.Multe laboratoare folosesc acum spectrofotometre ultra-micro pentru a analiza direct cantitativ probele de acid nucleic.În timp ce afișează valoarea absorbanței, programul oferă direct valoarea concentrației (acid nucleic, proteine ​​și colorant fluorescent) și rapoartele aferente.În ceea ce privește analiza valorii OD, Salvați această imagine și veți fi bine.

Lista de soluții universale cu valoare OD

Cu toate acestea, există câteva avertismente care trebuie prezentate separat pentru dvs.

(La urma urmei, știu că trebuie să fiți cei care economisesc și așteptați până când aveți nevoie de ele!)

Nota 1 Echipament

Valoarea OD va fi afectată de echipamente diferite.Atâta timp cât OD260 se află într-un anumit interval, valorile OD230 și OD280 sunt semnificative.De exemplu, domeniul de absorbție al Eppendorf D30 obișnuit la 260 nm este de 0 ~ 3A, iar NanoDrop One al Thermo este la 260 nm.Intervalul de absorbanță de 0,5 ~ 62,5 A.

Nota 2Reactiv de diluare

Valoarea DO poate fi afectată de diluarea diferiților reactivi.De exemplu, citirea OD260/280 a ARN purificat în pH7,5 10 mM Tristamponul este între 1,9-2,1, în timp ce însoluție apoasă neutrăraportul va fi mai mic, poate doar 1,8-2,0, dar asta nu înseamnă că calitatea ARN-ului se schimbă Diferența.

Nota 3Substante reziduale

Existența substanțelor reziduale va afecta acuratețea măsurării concentrației de acid nucleic, de aceea este necesar să se evite cât mai mult posibil resturile de proteine, fenol, polizaharide și polifenoli din probele de acid nucleic.

Cu toate acestea, de fapt, extracția cu reactivi organici este o metodă veche.În trusele comerciale, efectul de extracție poate fi obținut printr-o coloană de adsorbție pe bază de silice combinată cu centrifugare, evitând reactivii organici toxici și nocivi care sunt greu de îndepărtat etc. Problema, cum ar fiTrusa de extracție a acidului nucleic Foregene, nu folosește DNază/RNază și reactivi organici toxici pe tot parcursul operației, rapid și sigur, siefectul estebun(a spus din greșeală că a fost chel, dar știu că vrei să știi).

Exemplul 1: Randamentul și puritatea extracției ADN genomic

Kitul de izolare a ADN-ului din sol Foregene (DE-05511) tratează probe de sol din diverse surse, iar cantitatea și puritatea ADN-ului genomic obținute sunt prezentate în următorul tabel:
Exemplul 2: Randamentul și puritatea extracției ARN tisular

Kitul de izolare a ARN total animal (RE-03012) a procesat diverse probe de țesut, iar cantitatea și puritatea ARN-ului obținut sunt prezentate în tabelul de mai jos (pentru țesutul de șoarece):
Cu toate acestea, nu credeți că ați terminat cu valoarea OD.Ai grijă de punctele cheie pe care le-am desenat pentru tine în față?

Înștiințare

Moleculele de acid nucleic fragmentate vor fi, de asemenea, calculate în absorbanță.Presupunând că aveți resturi de ADN genomic în ARN, valoarea OD va părea a fi foarte mare, dar concentrația reală de ARN nu poate fi determinată.Dacă ARN-ul tău este Nu este clar dacă există degradare, așa că avem nevoie de o metodă de evaluare cuprinzătoare pentru a da o judecată mai precisă, adică evaluarea integrității acidului nucleic menționată în MIQE.