Metodele PCR și contaminarea cu aerosoli cu acid nucleic în laboratoarele de testare a acidului nucleic sunt ca două fețe ale unei monede.Putem alege doar să o avem sau nu, dar nu putem alege dacă vrem sau cheltuim.

1. Screening-ul de îndepărtare a ADN-ului

Pentru a obține îndepărtarea spațială a contaminării cu aerosoli cu acid nucleic, este mai întâi necesar să se elimine agenții de îndepărtare a ADN-ului care pot elimina acizii nucleici în stare lichidă.Pentru că nu există mulți agenți de îndepărtare a ADN-ului care funcționează cu adevărat.Pentru metoda experimentală, vă rugăm să consultați: Eliminatorul de ADN nu poate fi un „colț secret” al laboratorului!

În acest experiment, 100 de copii/μL (CT aproximativ 31) de plasmidă ASFV și agent de îndepărtare a ADN-ului cuantificat prin PCR digitală au fost amestecate în volume egale și apoi au reacționat la temperatura camerei timp de 10 min, 20 min și, respectiv, 30 min.După extracția acidului nucleic, a fost efectuată amplificarea qPCR.A fost comparat un control pozitiv amestecat cu plasmidă și apă.Deoarece experimentul nu a fost finalizat în același timp, poate exista o anumită abatere între rezultate, dar aceasta nu afectează încheierea experimentului.Până acum, am evaluat 10 produse comerciale pentru îndepărtarea ADN-ului.Numai produsele nr. 1, nr. 6 și nr. 8 pot degrada eficient ADN-ul plasmid în stare lichidă.Alte produse nu au aproape niciun efect.

Tabelul 1 Efectul de îndepărtare a acidului nucleic al agentului de îndepărtare a ADN-ului disponibil comercial

2. Experimentul cu efectul de îndepărtare a ADN al dezinfectanților utilizați în mod obișnuit

1. Screening-ul dezinfectanților utilizați în mod obișnuit

Există multe tipuri de dezinfectanți utilizați în mod obișnuit în laboratoare: aldehide, fenoli, alcooli, săruri de amoniu cuaternar, peroxizi, preparate cu clor și acizi și baze.Efectele de dezinfecție ale acestor dezinfectanți asupra microorganismelor au fost pe deplin verificate prin experimente, dar nu există suficiente date experimentale privind efectul de degradare al acizilor nucleici.Laboratoarele de testare a acidului nucleic au nevoie de un dezinfectant care nu numai că are un efect bun de dezinfecție asupra microorganismelor, dar poate și degrada ADN-ul.Rezultatele testelor arată că doar două preparate cu clor din 84 de dezinfectant și acid tricloroizocianuric și acid clorhidric 1 M îndeplinesc cerințele.Deoarece acidul clorhidric 1 M este foarte coroziv, se recomandă ca preparatele cu clor să fie folosite ca eliminare a deșeurilor în laboratoarele de testare a acidului nucleic.Cu toate acestea, preparatele cu clor sunt corozive pentru metale și nu pot fi utilizate pentru dezinfecția instrumentelor și echipamentelor.

Tabelul 2 Efectele de îndepărtare a ADN-ului diferitelor tipuri de dezinfectanți

2. Concentrația minimă efectivă a preparatelor cu clor

Dezinfectanții pe bază de clor au un efect puternic de degradare a ADN-ului, dar datorită coroziunii și iritației metalice, pot fi folosiți pentru curățarea podelei, blaturilor nemetalice, vârfurilor de înmuiere, tuburilor de centrifugă și a altor obiecte de testare.

Conform „Noului Ghid Tehnic de Dezinfecție Epidemică de Pneumonie Coronariană”: Poluanți (sângele pacienților, secrețiile și vărsăturile) clor disponibil 5g/L-10g/L dezinfectant care conține clor;podelele, pereții și suprafețele obiectelor folosesc clor disponibil 1g/L Dezinfectant cu clor: hainele, lenjeria de pat și alte textile sunt mai întâi înmuiate în dezinfectant cu clor cu 0,5 g/L clor disponibil timp de 30 de minute și apoi curățate ca de obicei.

Tabelul 3 Efectul de îndepărtare a ADN-ului la diferite concentrații de dezinfectant cu clor

Rezultatele testului arată că: atunci când concentrația efectivă de clor este mai mare sau egală cu 1,2 g/L, dezinfectantul care conține clor poate degrada complet 100 de copii/μL plasmida atunci când este utilizat timp de 5 minute.Când acționează timp de 10 minute, dezinfectantul 84 cu o concentrație eficientă de clor mai mare sau egală cu 0,6 g/L poate degrada complet 100 de copii/μL de plasmide.

3. Experiment de îndepărtare a aerului poluat cu aerosoli de acid nucleic

Cum să curățați aerul poluat de aerosoli de acid nucleic?Cele mai multe gânduri sunt de a crea un mediu contaminat cu aerosoli și apoi de a-l curăța sau de a curăța acizii nucleici după contaminare.Pentru mine, un experiment care nu poate fi repetat și rezultatele experimentului nu pot fi analizate cantitativ este lipsit de sens, așa că am împrumutat câteva metode de dezinfectare a aerului cu dezinfectare.Consultați „GB27948-2020 Cerințe generale pentru dezinfectanții de aer” și „Specificațiile tehnice de dezinfecție”

1. Materiale de testare

1.1 Dispozitiv de îndepărtare a ADN-ului: în acest experiment, au fost selectați doi agenți de îndepărtare a ADN-ului 6 și 8 din Tabelul 1 disponibili comercial.

1.2 Plasmidă de testare: Având în vedere că valoarea CT a majorității poluării de laborator va fi mai mare de 30, concentrația plasmidei genei ASFV utilizată de această dată este de aproximativ 100 de copii/μL, iar CT PCR cantitativ fluorescent este de aproximativ 31,07.Adăugați plasmida în tamponul de bumbac flocat și uscați la aer.

1.3 Instrument de testare: Instrumentul de dezinfecție Bilingkehan KVBOX, care este susținut cu amabilitate de Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., are performanțe excelente de dezinfectare a aerului cu dezinfectant cu peroxid de hidrogen și poate ucide eficient sporii și alte microorganisme.

1.4 Spațiu de testare: o fereastră de transfer închisă de aproximativ 0,1 metri cubi.

2. Metoda de testare

Cantitatea de dezinfectant setată pe mașina de dezinfectare este de 10 ml, iar concentrația este de 100 ml/m3, ceea ce este mult mai mare decât „GB27948-2020 Cerințe generale pentru dezinfectanții de aer”: atunci când utilizați dezinfectarea cu spray cu aerosoli, cantitatea de dezinfectant trebuie să fie ≤10 ml/m3