Ghid de analiză a problemelor

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Randament scăzut sau fără ADN

De obicei, există mulți factori care afectează randamentul ADN-ului genomic, inclusiv sursa probei, vârsta eșantionului, condițiile de depozitare a probei și operațiunea.

ADN-ul genomic nu a putut fi obținut în timpul extracției

1. Probele de țesut sunt stocate necorespunzător sau depozitate prea mult timp, ceea ce duce la degradarea ADN-ului genomic.

Recomandare: Păstrați probele de țesut în azot lichid sau -20°C;încercați să utilizați probe nou colectate pentru extracția ADN-ului genomic.

2. Cantitatea prea mică de probă poate face ca ADN-ul genomic corespunzător să nu fie extras.

Sugestie: Pentru mostrele de țesut care au fost depozitate pentru o lungă perioadă de timp sau au o degradare severă a ADN-ului genomic, cantitatea de probe de țesut poate fi crescută în mod corespunzător pentru a extrage ADN-ul genomic considerabil.Cantitatea de probă poate fi determinată în funcție de nevoile ADN-ului, dar proba proaspătă nu trebuie să depășească 100 mg, iar proba uscată nu trebuie să depășească 30 mg.

3. Proba nu este măcinată cu azot lichid sau plasată prea mult timp după azot lichid.

Sugestie: în timpul extracției ADN-ului, proba trebuie să fie complet măcinată cu azot lichid pentru a sparge peretele celular;după măcinare, vă rugăm să transferați proba de pulbere în PL1 preîncălzit la 65°C cât mai curând posibil (odată ce pulberea măcinată este topită, ADN-ul genomic va începe să se degradeze rapid).

4. Depozitarea necorespunzătoare a Proteazei Foregene are ca rezultat activitatea redusă sau inactivată.

Recomandare: Confirmați condițiile de depozitare a Foregene Protease sau înlocuiți-o cu o nouă Foregene Protease pentru hidroliza enzimatică.

5. Setul este depozitat necorespunzător sau depozitat prea mult timp, provocând defectarea unor componente din kit.

Recomandare: Achiziționați un nou kit de extracție a ADN-ului genomic din plante pentru operațiunile conexe.

6. Utilizarea necorespunzătoare a trusei.

Sugestie: Achiziționați un kit de izolare a ADN-ului vegetal dedicat probelor pentru extracția și purificarea ADN-ului genomic al plantelor.

7. Buffer WB fără a adăuga anihidră etanol.

Recomandare: Asigurați-vă că adăugați volumul corect de etanol absolut în Buffer WB.

8. Eluentul nu a fost picurat corect pe membrana de silice.

Sugestie: Adăugați eluentul preîncălzit la 65℃picături până la mijlocul membranei de silicagel și lăsați-o la temperatura camerei timp de 5 minute pentru a crește eficiența de eluare.

Extracție pentru a obține ADN genomic cu randament scăzut

1. Proba este depozitată necorespunzător sau stocată prea mult timp, ceea ce duce la degradarea ADN-ului genomic.

Recomandare: Păstrați probele de țesut la -20℃;încercați să utilizați probe de țesut nou colectate pentru extracția ADN-ului genomic.

2. Dacă cantitatea de probe de țesut este prea mică, ADN-ul genomic extras va fi mai mic.

Sugestie: Unele mostre de plante sunt bogate în apă, cum ar fi plantele acvatice precum algele etc., doza poate fi mărită în mod corespunzător sau apa poate fi deshidratată puțin înainte de operație.

3. Probele nu au fost măcinate bine cu azot lichid sau au fost lăsate la temperatura camerei prea mult timp după măcinare.

Sugestie: Măcinarea azotului lichid trebuie să fie suficientă, iar peretele celulei probei trebuie să fie rupt cât mai mult posibil;imediat după măcinare, proba de pulbere trebuie transferată la 65℃tampon PL1 preîncălzit pentru următorul pas.

4. Nu folosiți trusa corectă.

Recomandare: Folosiți un kit dedicat de izolare a ADN-ului plantelor pentru a extrage și purifica ADN-ul genomic al plantelor.

5. Depozitarea necorespunzătoare a Proteazei Foregene are ca rezultat activitatea redusă sau inactivată.

Recomandare: Confirmați condițiile de depozitare a Foregene Protease sau înlocuiți-o cu o nouă Foregene Protease pentru hidroliza enzimatică.

6. Problema eluentului

Recomandare: Vă rugăm să utilizați tampon EB pentru eluare;dacă se utilizează ddH₂O sau alți eluanți, asigurați-vă că pH-ul eluentului este între 7,0-8,5.

7. Eluentul nu este picurat corect

Sugestie: Vă rugăm să adăugați picătura de eluție în mijlocul membranei de silice și lăsați-o la temperatura camerei timp de 5 minute pentru a crește eficiența de eluare.

8. Volumul de eluant este prea mic

Sugestie: Vă rugăm să utilizați eluentul pentru eluarea ADN-ului genomic conform instrucțiunilor, cel puțin nu mai puțin de 100μl.

ADN genomic extras cu puritate scăzută

Puritatea scăzută a ADN-ului genomic va duce la eșecul sau efectul slab al experimentelor din aval, cum ar fi: enzima nu poate fi tăiată, iar fragmentul genei țintă nu poate fi obținut prin PCR.

1. Contaminare diverse cu proteine, contaminare cu ARN.

Analiză: Tamponul PW nu a fost utilizat pentru spălarea coloanei;Tamponul PW nu a fost folosit pentru a spăla coloana la viteza corectă de centrifugare.

Sugestie: încercați să vă asigurați că nu există precipitații în supernatant atunci când supernatantul este trecut prin coloană;asigurați-vă că spălați coloana de purificare cu Buffer PW conform instrucțiunilor, iar acest pas nu poate fi omis.

2. Poluarea cu ioni impurități.

Analiză: Coloana de spălare Buffer WB a fost omisă sau a fost spălată o singură dată, rezultând o contaminare ionică reziduală.

Recomandare: Asigurați-vă că spălați de două ori cu Buffer WB conform instrucțiunilor pentru a elimina cât mai mult posibil ionii reziduali.

3. Contaminarea cu RNază.

Analiză: RNază exogenă este adăugată la tampon;operația de spălare incorectă în Buffer PW va avea ca rezultat RNază reziduală și va afecta operațiunile experimentale de ARN din aval, cum ar fi transcripția in vitro.

Sugestie: kiturile de extracție a acidului nucleic din seria Foregene pot elimina ARN-ul fără RNază suplimentară, iar toți reactivii din Kitul de izolare ADN din plante nu au nevoie de RNază;asigurați-vă că spălați coloana de purificare cu Buffer PW conform instrucțiunilor, iar acest pas nu poate fi omis.

4. Reziduuri de etanol.

Analiză: După spălarea coloanei de purificare cu tampon WB, nu a fost efectuată nicio centrifugare în tub gol.

Recomandare: Urmați instrucțiunile pentru o centrifugare corectă a tubului gol.

Manual de instructiuni:

Manual de instrucțiuni kit de izolare a ADN-ului plantelor