Următoarea analiză a posibilelor probleme înbucaltampon/ALS card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Coloana de purificare este înfundată

În acest kit, în operația de extracție a ADN-ului genomic, coloana de purificare este direct adsorbită pe amestecul de liză enzimatică a probei fără pas de centrifugare, iar coloana de purificare poate fi blocată din cauza enzimizării incomplete și a vâscozității ridicate a probei.

Următoarele cauze posibile sunt următoarele:

1. Digestia enzimatică incompletă a probelor de țesut.

Recomandare: Timpul de procesare a probei de Foregene Protease poate fi prelungit în mod corespunzător sau supernatantul poate fi prelevat după centrifugare la 12.000 rpm (~13.400× g) timp de 5 min.

2. Utilizarea excesivă a probelor de țesut sau a țesuturilor mari.

Recomandare: Cel mai bine este să nu depășiți 1bucal tampon în probă;dacă proba este prea mare, creșteți doza de tampon ST1, Foregene Protease, tampon ST2 corespunzător.

3. Vâscozitatea probei este prea mare.

Recomandare: Probele pot fi diluate în mod corespunzător cu 10 mM de Tris-HCl înainte de extracția ADN-ului genomic.

4. Fragmente din cardul de sânge au fost supte.

Recomandare: Timpul de centrifugare tranzitorie al pasului 6 al extracției genomice a spotului de sânge (FTA Card) poate fi prelungit în mod corespunzător.

Randament scăzut sau fără ADN

Există adesea o varietate de factori care afectează randamentul ADN-ului genomic, inclusiv originea probei, condițiile de depozitare a probei, prepararea probei, manipularea etc.

ADN-ul genomic nu poate fi obținut în timpul extracției

Cauzele posibile sunt următoarele:

1. Conservarea necorespunzătoare a probelor sau depozitarea prea mult timp duce la degradarea ADN-ului genomic.

Recomandare: Tampoanele orale ar trebui, de preferință, să fie proaspăt prelevate și nu este recomandabil să se utilizeze tampoane conservate pentru operațiunile de extracție a ADN-ului genomic;probele de pete de sânge trebuie să se asigure că calitatea este calificată și că timpul de depozitare nu trebuie să fie prea lung.

2. Utilizarea prea mică a țesuturilor poate duce la nicio extracție a ADN-ului genomic corespunzător.

Recomandare: Urmațibuccal instrucțiunile de prelevare a probelor din ghidul de operare și ștergeți de cât mai multe ori posibil, astfel încât să poată fi atașate suficiente celule la tamponul oral pentru extracția ADN-ului genomic;pentru extragerea probei de pete de sânge, zona de tăiere a petelor de sânge poate fi mărită în mod corespunzător.

3. Proteaza anterioară este conservată necorespunzător, rezultând o scădere a activității sau inactivarea acesteia.

Recomandare: Confirmați condițiile de depozitare ala Foregene Proteaza sau înlocuiți-o cu o nouă Protează Foregene pentru reacția enzimatică.

4. Conservarea necorespunzătoare a trusei sau timpul de depozitare este prea lung, ducând la defectarea unor componente din kit.

Recomandare: Achiziționați un noubucal tampon de ADNizolare kit pentru proceduri aferente.

5. Tamponul WB nu adaugă etanol absolut.

Recomandare: Confirmați că tamponul WB adaugă volumul corect de etanol absolut.

6. Eluentul nu este adăugat corect pe filmul de silicon.

Recomandare: adăugați 65°Celuentul preîncălzit scade la mijlocul membranei de silicon și se lasă la temperatura camerei timp de 5 minute pentru a crește eficiența de eluare.

LADN genomic cu randament redus izolat

Următoarele cauze posibile sunt următoarele:

1. Conservarea necorespunzătoare a probelor sau depozitarea prea mult timp duce la degradarea ADN-ului genomic.

Recomandare: Tampoanele orale sunt de preferință proaspăt prelevate, iar tampoanele conservate nu trebuie utilizate pentru extracția ADN-ului genomic.

2. Dacă cantitatea de probă de țesut este prea mică, conținutul de ADN genomic extras va fi mai mic.

Recomandare: Urmați instrucțiunile de prelevare a probei pe tampon oral din ghidul de operare, ștergând de cât mai multe ori posibil, astfel încât să poată fi atașate suficiente celule la tamponul oral pentru extragerea ADN-ului genomic.

3. Proteaza anterioară este conservată necorespunzător, rezultând o scădere a activității sau inactivarea acesteia.

Recomandare: Confirmați condițiile de depozitare athe Foregene Proteaza sau înlocuiți-o cu una nouă Proteaza foregenă pentru reacția enzimatică.

4. Probleme cu eluent.

Recomandare: Utilizați tampon EB pentru eluare;dacă se utilizează ddH₂O sau alți eluanți, confirmați că pH-ul eluatului este între 7,0-8,5.

5. Eluatul nu este adăugat corect prin picurare.

Recomandare: Adăugați picături de eluent în mijlocul membranei de silicon și lăsați la temperatura camerei timp de 5 minute pentru a crește eficiența de eluare.

6. Lichidul de eluare se acumulează prea puțin.

Recomandare: Folosiți eluent pentru eluarea ADN-ului genomic, cel puțin așa cum se cere în instrucțiuninu mai puțin decat 15μl.

Low puritate of ADN genomicizolat

Puritatea scăzută a ADN-ului genomic poate duce la eșec sau la rezultate nesatisfăcătoare ale experimentelor din aval, cum ar fi: enzimele nu pot fi tăiate, PCR nu poate obține fragmentul de genă de interes etc.

Cauzele posibile sunt următoarele:

1. Poluarea cu heteroproteine, poluarea cu ARN.

Analiză: Coloana de purificare nu a fost spălată utilizând tampon PW;coloana de purificare cu spălare Buffer PW nu a fost spălată folosind viteza centrifugă corectă.

Recomandare: Asigurați-vă că nu există precipitare în supernatant înainte de a adăuga etanol;asigurați-vă că spălați coloana de purificare conform instrucțiunilor, iar acest pas nu poate fi omis.

2. Poluarea cu ioni impurități.

Analiză: Coloana de purificare a spălării tampon WB a fost omisă sau spălată o singură dată, rezultând o contaminare ionică reziduală.

Recomandare: Asigurați-vă că spălați Buffer WB de 2 ori conform instrucțiunilor pentru a elimina cât mai mult posibil ionii reziduali.

3. Contaminarea cu enzime ARN.

Analiză: RNazele străine au fost adăugate în tampon;Operația de spălare a tamponului PW a fost incorectă, ducând la reziduuri de RNază, care afectează operațiunile experimentale de ARN din aval, cum ar fi transcripția in vitro.

Recomandare: Acid nucleic din seria Foregeneizolatkiturile de alimentare pot elimina ARN-ul fără adăugarea suplimentară de RNază,prin urmare Kit de izolare ADN cu tampon bucal/FTA Cardnevoie't adăugați RNază;asigurați-vă că urmați instrucțiunile pentru coloana de purificare a spălării Buffer PW, iar acest pas nu poate fi omis.

4. Reziduu de etanol.

Analiză: Tamponul WB nu a efectuat centrifugarea tubului gol după spălarea coloanei de purificare.

Recomandare: Efectuați operațiunea corectă de centrifugare a tubului gol conform instrucțiunilor.

5. Alte poluări cu impurități.

Analiză: Probele salvate sau probele speciale nu sunt pretratate.

Recomandare: Pretratați complet proba conform instrucțiunilor.