Cât de multe știi

Despre Nextracția acidului ucleic

Începutul și sfârșitul acidului nucleic purificat

Totul este dificil la început, acidul nucleic purificat este cel mai mult

Inițierea experimentelor moleculare, pentru experimentele ulterioare

Succesul sau eșecul are un impact crucial.

Spectrofotometrul UV cu urme/ultra urme este favorizat de mulți cercetători științifici deoarece poate detecta concentrația de acid nucleic și reziduurile de proteine ​​și ioni de sare simplu, rapid și economic.

După cum știm cu toții, A260 înseamnă valoarea DO de absorbție a acidului nucleic, A280 înseamnă valoarea DO de absorbție a concentrației de proteine, A230 înseamnă valoarea absorbanței de concentrație de ioni de sare, astfel încât A260 poate converti concentrația de acid nucleic, A260/280 înseamnă reziduu de proteine, A260/230 înseamnă reziduu de ioni de sare, dar aceasta este doar o regulă bazată pe o regulă de cercetare mare.convenţional” a crede că poate explica puritatea ADN-ului și ARN-uluiîntr-o anumită măsură.Nu este singurul standard pentru identificarea randamentului și purității acidului nucleic, este folosit doar ca referință și nu este un „standard de aur”.

Manualul Thermo Fisher ND-2000 subliniază fiabilitatea rezultatelor testelor

Motivul este că rezultatele obținute prin utilizarea unui spectrofotometru UV micro/ultramicro reflectă doar randamentul și puritatea acidului nucleic din lateral și există mulți factori de influență (calea optică, volumul probei, concentrația probei, valoarea pH-ului, alți ioni care afectează măsurarea absorbanței etc.), valoarea măsurată a DO nu este neapărat exactă.În același timp, din cauza lipsei de specificitate a materialului de determinare a valorii absorbanței, ADN-ul monocatenar, ADN-ul dublu catenar, ARN, dNTP-urile și unele proteine ​​au toate vârfuri de absorbție la lungimea de undă de 260 nm, iar concentrația determinată de A260 singur nu este neapărat ADN-ul sau ARN-ul real.Concentrarea și integritatea și degradarea ei nu pot fi judecate.

Deci, cum să judecăm calitatea acidului nucleic purificat?Pe lângă utilizarea unui spectrofotometru UV micro/ultramicro pentru detecție, metode precum electroforeza pe gel de agaroză sunt, de asemenea, necesare pentru a afișa vizual puritatea și integritatea acidului nucleic și pentru a indica concentrația într-o anumită măsură.În acest fel, randamentul de acid nucleic și puritatea obținute din rezultatele de detecție a diferitelor metode sunt credibile.

Compararea grafică experimentală

ADN-ul genomic al celulelor H1299 a fost extras folosind kiturile de extracție ADN ale companiei A și s-a observat o contaminare semnificativă cu impurități, ceea ce a dus la valori ridicate ale OD.

(valoarea de măsurare a DO și electroferograma corespunzătoare)

Indicele de evaluare

Există un „standard de aur” pentru randamentul acidului nucleic și testarea calității?

Din câte știm, nu există o metodă simplă, rapidă și ieftină.Fie că este vorba de spectrofotometru, electroforeză pe gel sau spectrometrie de masă, toate reflectă concentrația și puritatea acidului nucleic din soluție din diferite aspecte și trebuie să fie judecate prin referire unul la celălalt.

Cel mai bun indice de evaluare este întotdeaunaaplicarea experimentală ulterioară.Nu afectează eficiența transcripției inverse și a amplificării PCR.Obținerea produselor de amplificare fiabile și a valorilor Ct și obținerea unei secvențe complete prin secvențiere reprezintă extracția cu succes a acidului nucleic.

Pentru a rezuma, punctul de vedere al teoriei numai a raportului ar trebui contestat de punctul de vedere al „utilizarii rezultatelor experimentale bune din aval ca parametri de extracție buni”!

Truse de extracție ADN ARN recomandate de Foregene pentru a obține o puritate ridicată ADN/ARN:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/