Stabiliți POS experiment PCR pentru a standardiza comportamentul personalului de experiment.
Experimentatorul respectă cu strictețe procedurile de operare și minimizează poluarea PCR care poate fi cauzată de factori umani sau previne apariția poluării.În plus, experimentatorul ar trebui să aibă cunoștințele și abilitățile profesionale corespunzătoare, inclusiv competența în operarea echipamentelor aferente, clarificarea întregului proces de lucru, stăpânirea metodelor de tratare a contaminării și a metodelor de control al calității în laborator și să fie capabil să interpreteze corect rezultatele testelor.
Stabiliți un laborator PCR standard.
Laboratorul PCR este împărțit în principiu în patru zone, și anume zona de preparare a reactivului, zona de prelucrare a probei, zona de amplificare și zona de analiză a produsului de amplificare.Primele două zone sunt zone de pre-amplificare, iar ultimele două zone sunt zone de post-amplificare.Zona de pre-amplificare și zona de post-amplificare ar trebui să fie strict separate.Materialele experimentale, reactivii, hârtie de înregistrare, pixurile, materialele de curățare etc., pot curge numai din zona de pre-amplificare în zona de post-amplificare, adică din zona de preparare a reactivului → zona de procesare a probei → zona de amplificare → zona de analiză a produsului de amplificare și nu trebuie să curgă înapoi.Fluxul de aer din laborator ar trebui, de asemenea, să curgă din zona de pre-amplificare în zona de post-amplificare și să nu curgă înapoi.Designul ideal de laborator PCR este prezentat mai jos:
Figura A: Modul de configurare ideal pentru laborator PCR cu presiune negativă în camera tampon
Figura B: Modul de configurare ideal pentru laborator PCR cu presiune pozitivă în camera tampon
Diagramele de configurare a laboratorului PCR prezentate în Figura A și Figura B ar trebui să fie un mod de configurare mai ideal, iar laboratorul cu condiții se poate referi la acest mod pentru proiectare.Pentru laboratoarele obișnuite, se recomandă ca zona de amplificare PCR și zona de analiză a produsului să poată fi separate, iar deschiderea capacului să fie redusă cât mai mult posibil în zona de pregătire a probei și zona de amplificare PCR.Rețineți: Produsele și consumabilele experimentale din zona de analiză a produsului sunt strict interzise să fie duse în zona de pregătire a probei și în zona de amplificare PCR.
Dacă laboratorul efectuează doar detectarea și identificarea prin PCR, se recomandă utilizarea PCR cantitativă fluorescentă în loc de PCR convențională.
Rezultatele de detecție PCR cantitativă prin fluorescență pot fi colectate și analizate prin semnale de fluorescență, astfel încât nu este nevoie să deschideți capacul pentru electroforeză după reacție, ceea ce evită contaminarea produsului PCR cauzată de scurgerea produselor de reacție pentru a forma aerosoli.Dacă creșteți numărul de deschideri ale capacului în timpul etapei de încărcare a electroforezei pe gel, este probabil să apară contaminarea cu aerosoli.Se recomandă promovarea aplicării PCR cantitativă și înlocuirea treptat a PCR calitativă.
Sistemul UNG anti-PCR de contaminare a produsului este utilizat pentru reacția PCR.
Sistemul folosește dUTP în loc de dTTP.După reacția PCR, toate produsele PCR (fragmente de ADN) sunt încorporate cu dUTP;în următoarea rundă de reacție PCR, enzima UNG adăugată în sistem este incubată la 37°C timp de 5 minute înainte de PCR, care poate degrada în mod specific toate fragmentele de ADN care conțin dUTP și apoi poate realiza reacția PCR.Acest lucru poate elimina complet contaminarea cu aerosoli cauzată de produsele PCR.Efectul este prezentat în figura de mai jos:
Notă: Pentru seria PCR directă, puteți alege produsele din serie ale sistemului de contaminare a produselor anti-PCR ForegeneSugera
Pentru laboratoarele care efectuează teste de genotipizare la scară largă, se recomandă cu tărie utilizarea sistemului UNG de contaminare a produselor anti-PCR pentru testarea reactanților, în plus față de construcția de laboratoare rezonabile.
Memento: Utilizarea acestui sistem nu poate elimina contaminarea produsului PCR care a fost deja cauzată.Prin urmare, sistemul UNG trebuie utilizat la începutul testului relevant, iar sistemul UNG trebuie utilizat pentru amplificarea PCR, astfel încât să se prevină contaminarea produselor PCR Fals pozitiv.
Se recomandă utilizarea sistemului Direct PCR-UNG al Foregene atunci când se efectuează teste pe scară largă, cum ar fi:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;
Kit PCR direct pentru semințe de plante-UNG;
Kit PCR direct pentru țesuturi animale-UNG;
Kit PCR direct Mouse Tail-UNG;
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Această serie de truse de la Foregenepoate nu numai să efectueze detectarea PCR rapid și pe scară largă, ci și să prevină și să controleze eficient contaminarea produsului PCR.
Ora postării: 19-03-2021
