Conduce

ARN lung necodificator, lncRNA este un ARN necodant cu o lungime mai mare de 200 de nucleotide, în general între 200-100000 nt.lncRNA reglează expresia genelor la niveluri epigenetice, transcripționale și post-transcripționale și participă la tăcere cromozomului X, amprenta genomului și modificarea cromatinei, activarea transcripției, interferența transcripției, transportul nuclear, reglarea ciclului celular, reglarea diferențierii celulare și efectele de compensare a dozei (efectul de compensare a dozei) și multe alte boli, care apar în prezent, sunt strâns legate de procesele de reglare și prevenire a bolilor umane. punctele fierbinți din domeniul biomedicinei.

01  Tipuri și caracteristici ale LncRNA

lncRNA este împărțit în mai multe tipuri în funcție de diferitele surse ale formării sale, așa cum se arată în figura de mai sus.Are urmatoarele caracteristici:

1. lncRNA-urile sunt de obicei mai lungi, cu expresie dinamică și diferite metode de splicing în timpul diferențierii
2. Comparativ cu genele codificatoare, lncRNA are de obicei un nivel de expresie mai scăzut
3. Majoritatea lncRNA-urilor au o specificitate evidentă de expresie temporală și spațială în procesul de diferențiere și dezvoltare a țesuturilor
4. Există expresii caracteristice în tumori și alte boli
5. Locațiile subcelulare ale ARNlnc sunt diverse
6. Secvența este scăzută în conservare, dar funcția are un anumit grad de conservare etc.

02 Întrebări frecvente despre transcripția inversă LncRNA

Datorită conținutului scăzut de lncARN în celule, lungimii lungi și structurii de nivel înalt, un astfel de ARN are adesea structuri complexe, cum ar fi bucle de tulpină sau ace de păr, iar RT-qPCR este predispusă la probleme de transcripție inversă nereușită sau eficiență scăzută.

03 Soluție de transcripție inversă LncRNA

În regula centrală, procesul de viruși ARN folosind propria lor transcriptază inversă pentru a sintetiza ADN folosind ARN ca șablon se numește transcripție inversă.Procesul de utilizare a transcriptazei inverse a virusului ARN pentru a sintetiza matrița de ADNc in vitro se numește transcripție inversă.Elementele principale incluse în sistemul de transcripție inversă: matrița ARN, transcriptaza inversă, primeri și alte componente.

1.Șablon ARN

Influența șablonului de ARN asupra transcripției inverse se reflectă în structura, puritatea și integritatea acestuia.Cu cât puritatea și integritatea ARN-ului extras sunt mai mari, cu atât eficiența transcripției inverse este mai mare și rezultatele cantitative ulterioare sunt mai precise.ARN-ul purificat prin reactivii de extracție ARN utilizați în mod obișnuit conține adesea reziduuri de alcool și săruri de guanidină, care au un efect inhibitor puternic asupra majorității transcriptazei inverse.

2. Reverse transcriptază

Transcriptaza inversă are o influență cheie în întregul sistem de transcripție inversă.Temperatura potrivită pentru transcriptaza inversă utilizată în majoritatea laboratoarelor este în general de 42°C.De fapt, deschiderea structurii de ARN de nivel înalt necesită o temperatură mai mare, iar cerințele pentru transcriptază inversă sunt mai mari.

3.Grund

Primerii de transcripție inversă includ primeri specifici genei, primeri aleatori și primeri Oligo dT.Majoritatea lncRNA-urilor nu conțin cozi poliA și este important să se potrivească corect primerii aleatori cu Oligo dT.

4.Alte componente

Având în vedere faptul că ARN-ul este deosebit de ușor de degradat, introducerea de componente în sistemul de transcripție inversă poate fi minimizată, ceea ce poate preveni în mod eficient intrarea RNazei și poate asigura progresul lin al transcripției inverse.

Foregenobține din matrița de ARN, transcripție inversă la qPCR

Însoțiți-vă complet detectarea lncRNA

ARN total animal IsolareKit (cu coloană de îndepărtare a ADNg)

ARN total celular IsolareKit (cu coloană de îndepărtare a ADNg)

Lnc-RT HeroTM I (Cu gDNază) (Super Premix pentru sinteza cADN-ului prima catenă din lncARN)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Aavantaje ofExtracția ARN:

Kitul folosește tehnologia de extracție a ARN de a treia generație, nu este nevoie să utilizați DNază.

11 minute de la celule cultivate pe placă cu 96, 24, 12 și 6 godeuri, extracție de înaltă eficiență a ARN celular total de înaltă calitate, fără gADN, puritate ridicată.

Avantajele transcripției inverse lncRNA:

Un sistem de transcripție inversă dezvoltat special pentru LncRNA pentru a elimina rapid contaminarea ADN-ului genomic.

Sistemul de transcripție inversă are stabilitate termică ridicată și are încă performanțe bune de transcriere inversă la 50°C.

Șabloanele cu conținut ridicat de GC și structură secundară complexă pot fi inversate cu eficiență ridicată.

Avantajeof qPCR:

Foregene Taq Polymerase cu pornire la cald are o eficiență mai mare de amplificare, o sensibilitate mai mare de amplificare și o specificitate mai mare de amplificare

Real PCR Easy Mix optimizat face ca SYBR Green I să aibă o sensibilitate de detecție mai mare, iar intensitatea sa de fluorescență este de 3-5 ori mai mare decât a produselor similare, care pot satisface nevoile diferitelor tipuri de experimente cantitative de fluorescență.