Sfaturi pentru îmbunătățirea recuperării lipiciului

1. Creșteți încărcarea probei în timpul electroforezei.

2. Utilizați tampon de electroforeză proaspăt preparat.

3. Când tăiați lipici, încercați să tăiați numai lipiciul cu benzi pentru a reduce volumul de tăiere a lipiciului: nu aveți nevoie de lipici cu fragmente de scop, altfel va afecta rata de recuperare.

4. După ce topești două sau mai multe bucăți de lipici, folosește un tub oricât de mare ar fi volumul și transferă-l în aceeași coloană.

5. Soluția adăugată în sol poate fi puțin mai mult, ceea ce este mai propice pentru legarea ADN-ului de membrană, dar în general nu depășește 750ul.

6. Cheia recuperării gelului este legarea ADN-ului de coloană prin concentrația de sare, aciditatea (încărcarea) și hidrofobicitatea soluției din coloană.Prin urmare, dacă pH-ul tamponului de electroforeză este prea mare, se pot adăuga la sol 10ul (pH 5,0, 3mol/L NaAC);pentru a intercepta mai bine moleculele de ADN de pe membrană, se poate adăuga izopropanol 30% pentru a se încălzi în lichid după dizolvarea adezivului.

7. Înainte de adăugarea eluentului, lăsați coloana la temperatura camerei timp de câteva minute (aproximativ 10 minute) pentru a se evapora complet etanolul.

8. În cele din urmă, adăugați mai puțin eluent pentru a minimiza volumul de recuperare.În general, pentru eluare se utilizează 30-50μl de eluent (nu prea puțin, altfel nu va putea umezi membrana, ceea ce nu este propice eluării);picăturile de eluție sunt în centrul membranei, pentru a elua complet ADN-ul legat de membrană.

9. După adăugarea eluentului, acesta poate fi eluat într-o baie de apă de 55 de grade timp de 5 minute sau plasat într-o baie de apă de 50 de grade pentru mai mult de 10 minute, sau sigilat cu un parafilm la 4 grade peste noapte, apoi centrifugat pentru recuperare a doua zi, efectul este bun.

10.Adăugați eluatul centrifugat înapoi în coloana de adsorbție și centrifugați din nou.

Metode și proceduri detaliate pentru recuperarea produsului PCR

1. Reciclarea obișnuită a cauciucului

Dacă doriți să recuperați lipiciul, cel mai bine este să utilizați un kit, care este convenabil și are o rată de recuperare puțin mai mare.Dacă chiar trebuie să-l recuperați manual, puteți adăuga de 3 ori volumul de TE după tăierea lipiciului.După topirea într-o baie de apă, fenolul, fenolul/cloroformul se extrag curat și se precipită etanolul.Asta este.

2. Recuperarea ADN-ului din geluri cu punct de topire scăzut

Purificarea fragmentelor de ADN Se adaugă TE (10 mmol/l Tris-HCI pH 8,0, 0,1 mmol/l EDTA) egal cu volumul gelului și se pune într-o baie de apă la 65°C timp de 5 minute pentru a dizolva complet gelul.

După ce a fost adus la temperatura camerei, s-a adăugat o cantitate egală de fenol (saturat cu TE, TE a fost sigilat în stratul superior, iar stratul inferior de fenol a fost îndepărtat) și amestecul a fost amestecat ușor (nu este necesară amestecarea) și centrifugat la 12.000 rpm timp de 3 minute.Repetați de 1-2 ori.

Se ia supernatantul, se adaugă 0,1 volum de acetat de sodiu 3mol/L (pH 5,2) și de 2,5 ori volumul de etanol absolut pentru a efectua precipitarea cu etanol.Se dizolvă ADN-ul purificat cu o cantitate adecvată de TE, se măsoară conținutul și se pregătește pentru utilizare (poate fi utilizat pentru analiza structurii genei țintă, prepararea sondei etc.).

3. Recuperare PCR cu o bună specificitate de amplificare

Dacă specificitatea amplificării PCR este bună, este doar o simplă purificare și recuperare a produsului PCR.Puteți adăuga 50 ug/ml proteinază K la produsul PCR, 37 de grade timp de 1 oră, extrageți o dată cu fenol/cloroform, extrageți o dată cu cloroform și adăugați 0,1 volum de supernatant.Acetatul de sodiu a fost recuperat prin precipitare cu 2,5 volume de etanol absolut.

Produse asemanatoare:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/