Întrebări frecvente pentruKit de izolare a ARN total animal

Următoarea analiză a problemelor pe care le puteți întâlniextracția ARN-ului de țesut/celulă animal will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

ARN-ul nu este extras sau randamentele de ARN sunt scăzute

Există adesea o varietate de factori care afectează eficiența recuperării, cum ar fi: conținutul de ARN al probei de țesut, metoda de operare, volumul de eluție etc.

1. Baie de gheață sau centrifugare criogenică (4 °C) a fost efectuată în timpul funcționării.

Recomandare: Funcționați la temperatura camerei (15-25 ° C) pe tot parcursul procesului, nu faceți baie cu gheață și centrifugați la temperaturi scăzute.

2. Conservarea necorespunzătoare a probei sau timp excesiv de păstrare a probei.

Recomandare: Păstrați probele la -80 °C sau congelați în azot lichid și evitați utilizarea repetată a înghețului-dezghețului;încercați să utilizați țesut proaspăt sau celule cultivate pentru extracția ARN.

3. Liza insuficientă a probei.

Recomandare: La omogenizarea țesutului, asigurați-vă că țesutul este suficient de omogenizat și că celulele țesutului sunt suficient de divizate pentru a explica eliberarea de ARN.

4. Eluentul nu este adăugat corect.

Recomandare: Confirmați că ddH fără RNază₂O se adaugă prin picurare la mijlocul membranei coloanei de purificare.

5. Volumul corect de etanol absolut nu a fost adăugat la tamponul RL2 sau tamponul RW2.

Recomandare: Urmați instrucțiunile, adăugați volumul corect de etanol absolut în Buffer RL2 și Buffer RW2 și amestecați bine înainte de a utiliza kitul.

6. Dozarea probei de țesut nu este adecvată.

Recomandare: Folosiți 10-20 mg de țesut sau (1-5) × 10⁶celule per 500 μl tampon RL1, deoarece utilizarea excesivă a țesuturilor poate duce la o extracție redusă de ARN.

7. Volum de eluare necorespunzător sau eluare incompletă.

Recomandare: Volumul de eluare al coloanei de purificare este de 50-200 μl;dacă efectul de eluție nu este satisfăcător, se recomandă extinderea timpului de plasare la temperatura camerei după adăugarea ddH preîncălzită fără RNază₂O, de exemplu, timp de 5-10 min.

8. Coloana de purificare are reziduuri de etanol după spălarea tamponului RW2.

Recomandare: Dacă există reziduuri de etanol după spălarea tamponului RW2, centrifugare tub gol timp de 1 min, timpul pentru operația de centrifugare tub gol poate fi mărit la 2 minute sau coloana de purificare poate fi plasată la temperatura camerei timp de 5 minute pentru a elimina în mod adecvat etanolul rezidual.

ARN-ul purificat este degradat

Calitatea ARN-ului purificat este legată de factori precum conservarea probei, contaminarea cu RNază și manipularea etc.

1. Probele de țesut nu sunt păstrate la timp.

Recomandare: Dacă probele de țesut sau celulele nu sunt utilizate în timp util după colectare, crioconservați imediat la -80 °C sau azot lichid.Pentru a extrage ARN, utilizați o probă de țesut sau de celulă nou prelevată ori de câte ori este posibil.

2. Înghețare-dezghețare repetată a probelor de țesut.

Recomandare: La depozitarea probelor de țesut, cel mai bine este să le tăiați în bucăți mici pentru conservare și să îndepărtați una dintre bucăți atunci când le utilizați pentru a evita înghețarea-dezghețarea repetată a probei și degradarea ARN-ului.

3. RNase este introdusă sau nu purtând mănuși de unică folosință, măști etc. în timpul operației.

Recomandare: Experimentele de extracție a ARN sunt cel mai bine efectuate în camere separate de manipulare a ARN și tabelul este șters înainte de experiment.

Purtați mănuși și măști de unică folosință în timpul experimentului pentru a minimiza degradarea ARN cauzată de introducerea RNazei.

4. Reactivii sunt contaminați cu RNază în timpul utilizării.

Recomandare: Înlocuiți cu un nou kit de izolare a ARN total animal pentru experimente conexe.

5. Tuburile de centrifugă, vârfurile etc. utilizate în manipularea ARN-ului sunt contaminate cu RNază.

Recomandare: Confirmați că tuburile de centrifugă, vârfurile, pipetele etc. utilizate în extracția ARN sunt toate fără RNază.

ARN-ul obținut purificat afectează experimentele din aval

ARN purificat prin coloana de purificare, în cazul în care ionii de sare, conținutul de proteine ​​este prea mare va afecta experimentul din aval, cum ar fi: transcrierea inversă,Northern Blot și colab.

1. ARN-ul eluat are resturi de ioni de sare.

Recomandare: Confirmați că a fost adăugat volumul corect de etanol în tamponul RW2 și efectuați 2 spălări pe coloana de purificare la viteza centrifugă indicată pentru funcționare;dacă există reziduuri de ioni de sare, lăsați coloana de purificare în tamponul RW2 timp de 5 minute la temperatura camerei și efectuați centrifugarea pentru a maximiza îndepărtarea contaminării cu sare.

2. Rezidu de etanol în ARN eluat.

Recomandare: Confirmați că după spălarea tamponului RW2, efectuați operația de centrifugare a tubului gol la viteza de centrifugare indicată pentru funcționare, măriți timpul de centrifugare a tubului gol la 2 minute dacă mai există reziduuri de etanol sau lăsați-l la temperatura camerei timp de 5 minute după centrifugarea tubului gol pentru a maximiza eliminarea reziduului de etanol.

Izolarea tipurilor de probe de acid ulceic

Trusele de izolare ARN de la Foregene pot obține izolarea/extracția totală a ARN din următoarele surse de probă: țesut animal, plantă, celule, virus, sânge, etc.

Cum depozitez trusa

Pastrare la temperatura camerei timp de 24 de luni.