Kit de izolare a ARN total animal Truse de extracție și purificare a ARN total pentru țesuturi și celule animale
Descriere kit:
Extrageți rapid și eficient ARN total de înaltă puritate și de înaltă calitate din diferite țesuturi animale.
Nu trebuie să vă faceți griji cu privire la degradarea ARN-ului.Întregul sistem este fără RNază
Îndepărtați eficient ADN-ul folosind coloana de curățare ADN
Îndepărtați ADN-ul fără a adăuga ADNază
Simplu - toate operațiunile sunt finalizate la temperatura camerei
Rapid - operațiunea poate fi finalizată în 30 de minute
Sigur – nu se utilizează reactiv organic
Puritate ridicată—OD260/280≈1,8-2,1
Descrieri kituri
50 de pregătiri, 200 de pregătiri
Acest kit foloseștespin coloana și formuladezvoltat de compania noastră, care poate extrage ARN total de înaltă puritate și de înaltă calitate din diferite țesuturi animale cu eficiență ridicată. Oferă o coloană eficientă de curățare a ADN-ului, care poate separa și adsorbi cu ușurință ADN-ul genomic din supernatant și lizat de țesut, simplu și economisește timp;Coloana numai cu ARN poate lega eficient ARN-ul și poate fi procesată simultan cu o formulă unică O mulțime de probe.
Întregul sistem este RNază-Free, astfel încât ARN-ul extras să nu fie degradat;Sistem de spălare tampon RW1, tampon RW2, astfel încât ARN-ul obținut să fie lipsit de poluare cu proteine, ADN, ioni și compuși organici.
Componentele trusei
| Kit de izolare a ARN total animal | ||
| Componentele trusei | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| tampon RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Tampon RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| DdH2O fără RNază | 10 ml | 40 ml |
| Coloană numai ARN | 50 | 200 |
| Coloana de curățare ADN | 50 | 200 |
| Manual de instructiuni | 1 bucata | 1 bucata |
Informații despre produs
| Format | Rotire coloană | Componenta de purificare | Coloana de gena anterioară, reactiv |
| Flux | 1-24 mostre | Timp per pregătire | ~30 min (24 mostre) |
| Centrifuga | Centrifuga de birou | Separarea prin piroliză | Separarea centrifuga |
| Probă | țesut animal;celulă | Cantitatea de mostre | Țesut: 10-20 mg;Celulă:(1-5)×106 |
| Volumul de eluție | 50-200 μL | Volumul maxim de încărcare | 850 μL |
Caracteristici și avantaje
■ Nu trebuie să vă faceți griji cu privire la degradarea ARN;întregul sistem este fără RNază
■ Îndepărtați eficient coloana de curățare ADN care utilizează ADN
■ Îndepărtați ADN-ul fără a adăuga ADNază
■ Simplu-toate operațiunile sunt finalizate la temperatura camerei
■ Operarea rapidă poate fi finalizată în 30 de minute
■ Sigur - nu este necesar reactiv organic
■ Puritate ridicată -OD260/280≈1,8-2,1
Aplicare kit
Este potrivit pentru extracția și purificarea ARN total dintr-o varietate de țesuturi animale proaspete sau congelate sau celule de cultură.
Parametrii produsului
■ Aplicații în aval: sinteza cADN-ului prima catenară, RT-PCR, clonarea moleculară, Northern Blot etc.
■ Probe: ţesuturi animale, celule de cultură
■ Dozaj: Țesuturi 10-20mg, Celule(2-5)×106
■ Capacitatea maximă de legare ADN a coloanei de purificare: 80 μg
■ Volumul de eluare: 50-200 μl
Diagramă
Kit de izolare ARN total animal tratat 20 mg
Probe proaspete de șoarece, luați 5% ARN total purificat 1% agar
Electroforeza cu glicogel
1: Splina 2: Rinichi
3: Ficat 4: Inima
Depozitare și termen de valabilitate
Setul poate fi păstrat timp de 24 de luni la temperatura camerei (15-25 ℃) sau 2-8 ℃ pentru un timp mai lung.Tamponul RL1 poate fi păstrat la 4 ℃ timp de 1 lună după adăugarea de β-mercaptoetanol (opțional).
Articole citate
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., şi colab.Nanoparticule asemănătoare cu lipide încărcate cu ARNm pentru editarea bazei hepatice prin optimizarea designului central compozit.Adv.Funct.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J și colab.Apoptoza spontană a celulelor în prepararea terapeutică a celulelor stem exercită efecte imunomodulatoare prin eliberarea fosfatidilserinei.Transductul de semnal țintă Ther.14 iulie 2021;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF: 17,97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.Modificarea ARNt-ului N7-metilguanozină îmbunătățește translația ARNm oncogenă și promovează progresia colangiocarcinomului intrahepatic.Celula Mol.29 iulie 2021: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9,225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Modificarea m6A mediată de Mettl14 facilitează regenerarea ficatului prin menținerea homeostaziei reticulului endoplasmatic.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Truse de izolare ARN pentru alte surse de mostreSunt disponibile:
Celulă, plantă, virală, sânge etc.
ARN-ul nu este extras sau randamentele de ARN sunt scăzute
Există adesea o varietate de factori care afectează eficiența recuperării, cum ar fi: conținutul de ARN al probei de țesut, metoda de operare, volumul de eluție etc.
1. Baie de gheață sau centrifugare criogenică (4 °C) a fost efectuată în timpul funcționării.
Recomandare: Funcționați la temperatura camerei (15-25 ° C) pe tot parcursul procesului, nu faceți baie cu gheață și centrifugați la temperaturi scăzute.
2. Conservarea necorespunzătoare a probei sau timp excesiv de păstrare a probei.
Recomandare: Păstrați probele la -80 °C sau congelați în azot lichid și evitați utilizarea repetată a înghețului-dezghețului;încercați să utilizați țesut proaspăt sau celule cultivate pentru extracția ARN.
3. Liza insuficientă a probei.
Recomandare: La omogenizarea țesutului, asigurați-vă că țesutul este suficient de omogenizat și că celulele țesutului sunt suficient de divizate pentru a explica eliberarea de ARN.
4. Eluentul nu este adăugat corect.
Recomandare: Confirmați că ddH fără RNază2O se adaugă prin picurare la mijlocul membranei coloanei de purificare.
5. Volumul corect de etanol absolut nu a fost adăugat la tamponul RL2 sau tamponul RW2.
Recomandare: Urmați instrucțiunile, adăugați volumul corect de etanol absolut în Buffer RL2 și Buffer RW2 și amestecați bine înainte de a utiliza kitul.
6. Dozarea probei de țesut nu este adecvată.
Recomandare: Folosiți 10-20 mg de țesut sau (1-5) × 106celule per 500 μl tampon RL1, deoarece utilizarea excesivă a țesuturilor poate duce la o extracție redusă de ARN.
7. Volum de eluare necorespunzător sau eluare incompletă.
Recomandare: Volumul de eluare al coloanei de purificare este de 50-200 μl;dacă efectul de eluție nu este satisfăcător, se recomandă extinderea timpului de plasare la temperatura camerei după adăugarea ddH preîncălzită fără RNază2O, de exemplu, timp de 5-10 min.
8. Coloana de purificare are reziduuri de etanol după spălarea tamponului RW2.
Recomandare: Dacă există reziduuri de etanol după spălarea tamponului RW2, centrifugare tub gol timp de 1 min, timpul pentru operația de centrifugare tub gol poate fi mărit la 2 minute sau coloana de purificare poate fi plasată la temperatura camerei timp de 5 minute pentru a elimina în mod adecvat etanolul rezidual.
ARN-ul purificat este degradat
Calitatea ARN-ului purificat este legată de factori precum conservarea probei, contaminarea cu RNază și manipularea etc.
1. Probele de țesut nu sunt păstrate la timp.
Recomandare: Dacă probele de țesut sau celulele nu sunt utilizate în timp util după colectare, crioconservați imediat la -80 °C sau azot lichid.Pentru a extrage ARN, utilizați o probă de țesut sau de celulă nou prelevată ori de câte ori este posibil.
2. Înghețare-dezghețare repetată a probelor de țesut.
Recomandare: La depozitarea probelor de țesut, cel mai bine este să le tăiați în bucăți mici pentru conservare și să îndepărtați una dintre bucăți atunci când le utilizați pentru a evita înghețarea-dezghețarea repetată a probei și degradarea ARN-ului.
3. RNase este introdusă sau nu purtând mănuși de unică folosință, măști etc. în timpul operației.
Recomandare: Experimentele de extracție a ARN sunt cel mai bine efectuate în camere separate de manipulare a ARN și tabelul este șters înainte de experiment.
Purtați mănuși și măști de unică folosință în timpul experimentului pentru a minimiza degradarea ARN cauzată de introducerea RNazei.
4. Reactivii sunt contaminați cu RNază în timpul utilizării.
Recomandare: Înlocuiți cu un nou kit de izolare a ARN total animal pentru experimente conexe.
5. Tuburile de centrifugă, vârfurile etc. utilizate în manipularea ARN-ului sunt contaminate cu RNază.
Recomandare: Confirmați că tuburile de centrifugă, vârfurile, pipetele etc. utilizate în extracția ARN sunt toate fără RNază.
ARN-ul obținut purificat afectează experimentele din aval
ARN purificat prin coloana de purificare, în cazul în care ionii de sare, conținutul de proteine este prea mare va afecta experimentul din aval, cum ar fi: transcrierea inversă,Northern Blot și colab.
1. ARN-ul eluat are resturi de ioni de sare.
Recomandare: Confirmați că a fost adăugat volumul corect de etanol în tamponul RW2 și efectuați 2 spălări pe coloana de purificare la viteza centrifugă indicată pentru funcționare;dacă există reziduuri de ioni de sare, lăsați coloana de purificare în tamponul RW2 timp de 5 minute la temperatura camerei și efectuați centrifugarea pentru a maximiza îndepărtarea contaminării cu sare.
2. Rezidu de etanol în ARN eluat.
Recomandare: Confirmați că după spălarea tamponului RW2, efectuați operația de centrifugare a tubului gol la viteza de centrifugare indicată pentru funcționare, măriți timpul de centrifugare a tubului gol la 2 minute dacă mai există reziduuri de etanol sau lăsați-l la temperatura camerei timp de 5 minute după centrifugarea tubului gol pentru a maximiza eliminarea reziduului de etanol.
