Kit de izolare a ARN total al celulelor Truse de purificare pentru izolare a ARN total din celulă
Descriere kit:
ARN total foarte purificat și de înaltă calitate poate fi obținut din diferite celule cultivate în 11 minute.
Fără RNază
Funcționează la temperatura camerei (15-25℃)
Cu coloană de curățare ADN
Randament ridicat de ARN
Rapid: Terminați extracția în 11 minute
Siguranță: Nici unul Chimic organic
Descriere
Acest kit folosește coloana de spin și formula dezvoltate de Foregene, care poate extrage eficient ARN total de înaltă puritate și de înaltă calitate din celulele cultivate în plăci cu 96, 24, 12 și 6 godeuri.
Setul oferă o coloană eficientă de curățare a ADN-ului, care poate separa cu ușurință supernatantul și lizatul celular, poate lega și îndepărta ADN-ul genomic.Operația este simplă și economisește timp.
TColoana numai cu ARN poate lega eficient ARN-ul cu o formulă unică.Un număr mare de probe pot fi procesate simultan.
Componentele trusei
| Compoziția trusei | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Tampon cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| DdH2O fără RNază | 10 ml | 40 ml |
| Coloana numai ARN | 50 | 200 |
| Coloana de curățare ADN | 50 | 200 |
| Instruire | 1 | 1 |
*Vă rugăm să purtați mănuși și să luați măsuri de protecție în timpul operațiunii, deoarece Buffer cRL1 și Buffer RW1 conțin săruri haotrope iritante.
Caracteristici și avantaje
■ Întregul proces este operat la temperatura camerei (15-25℃), fără baie de gheață și centrifugare la temperatură joasă.
■ Întregul kit nu conține RNază, nu trebuie să vă faceți griji cu privire la degradarea ARN-ului.
■ Coloana de curățare ADN leagă în mod specific ADN-ul, astfel încât trusa să poată elimina contaminarea ADN-ului genomic fără a adăuga DNază suplimentară.
■ Randament ridicat de ARN: coloana numai cu ARN și formula unică pot purifica eficient ARN-ul.
■ Viteză mare: ușor de utilizat și poate fi finalizat în 11 minute.
■ Siguranţă: Nu este necesar niciun reactiv organic.
■ Calitate înaltă: ARN-ul purificat este de înaltă puritate, fără proteine și alte impurități și poate îndeplini diverse experimente ulterioare.
Aplicare kit
Este potrivit pentru extracția și purificarea ARN-ului total din celulele cultivate în plăci cu 96, 24, 12 și 6 godeuri.
Fluxul de lucru
Diagramă
Diagrama bateriei cu gel de agaroză a kit-ului de izolare Cell Total ARN a tratat numărul diferit de celule de mai sus, 20μl de eluție în volum, 2μl de ARN total purificat 1%.
Depozitare și termen de valabilitate
Setul poate fi păstrat timp de 12 luni la temperatura camerei (15-25 ℃) sau 2-8 ℃ pentru o perioadă mai lungă (24 de luni).
Tamponul cRL1 poate fi păstrat la 4 ℃ timp de 1 lună după adăugarea 2-hidroxi-1-etantiol (opțional).
ARN-ul nu este extras sau randamentele de ARN sunt scăzute
Există adesea o varietate de factori care afectează eficiența recuperării, cum ar fi: conținutul de ARN al probei de țesut, metoda de operare, volumul de eluție etc.
1. Baie de gheață sau centrifugare criogenică (4 °C) a fost efectuată în timpul funcționării.
Recomandare: Funcționați la temperatura camerei (15-25 ° C) pe tot parcursul procesului, nu faceți baie cu gheață și centrifugați la temperaturi scăzute.
2. Conservarea necorespunzătoare a probei sau timp excesiv de păstrare a probei.
Recomandare: Păstrați probele la -80 °C sau congelați în azot lichid și evitați utilizarea repetată a înghețului-dezghețului;încercați să utilizați țesut proaspăt sau celule cultivate pentru extracția ARN.
3. Liza insuficientă a probei.
Recomandare: La omogenizarea țesutului, asigurați-vă că țesutul este suficient de omogenizat și că celulele țesutului sunt suficient de divizate pentru a explica eliberarea de ARN.
4. Eluentul nu este adăugat corect.
Recomandare: Confirmați că ddH fără RNază2O se adaugă prin picurare la mijlocul membranei coloanei de purificare.
5. Volumul corect de etanol absolut nu a fost adăugat la tamponul RL2 sau tamponul RW2.
Recomandare: Urmați instrucțiunile, adăugați volumul corect de etanol absolut în Buffer RL2 și Buffer RW2 și amestecați bine înainte de a utiliza kitul.
6. Dozarea probei de țesut nu este adecvată.
Recomandare: Folosiți 10-20 mg de țesut sau (1-5) × 106celule per 500 μl tampon RL1, deoarece utilizarea excesivă a țesuturilor poate duce la o extracție redusă de ARN.
7. Volum de eluare necorespunzător sau eluare incompletă.
Recomandare: Volumul de eluare al coloanei de purificare este de 50-200 μl;dacă efectul de eluție nu este satisfăcător, se recomandă extinderea timpului de plasare la temperatura camerei după adăugarea ddH preîncălzită fără RNază2O, de exemplu, timp de 5-10 min.
8. Coloana de purificare are reziduuri de etanol după spălarea tamponului RW2.
Recomandare: Dacă există reziduuri de etanol după spălarea tamponului RW2, centrifugare tub gol timp de 1 min, timpul pentru operația de centrifugare tub gol poate fi mărit la 2 minute sau coloana de purificare poate fi plasată la temperatura camerei timp de 5 minute pentru a elimina în mod adecvat etanolul rezidual.
ARN-ul purificat este degradat
Calitatea ARN-ului purificat este legată de factori precum conservarea probei, contaminarea cu RNază și manipularea etc.
1. Probele de țesut nu sunt păstrate la timp.
Recomandare: Dacă probele de țesut sau celulele nu sunt utilizate în timp util după colectare, crioconservați imediat la -80 °C sau azot lichid.Pentru a extrage ARN, utilizați o probă de țesut sau de celulă nou prelevată ori de câte ori este posibil.
2. Înghețare-dezghețare repetată a probelor de țesut.
Recomandare: La depozitarea probelor de țesut, cel mai bine este să le tăiați în bucăți mici pentru conservare și să îndepărtați una dintre bucăți atunci când le utilizați pentru a evita înghețarea-dezghețarea repetată a probei și degradarea ARN-ului.
3. RNase este introdusă sau nu purtând mănuși de unică folosință, măști etc. în timpul operației.
Recomandare: Experimentele de extracție a ARN sunt cel mai bine efectuate în camere separate de manipulare a ARN și tabelul este șters înainte de experiment.
Purtați mănuși și măști de unică folosință în timpul experimentului pentru a minimiza degradarea ARN cauzată de introducerea RNazei.
4. Reactivii sunt contaminați cu RNază în timpul utilizării.
Recomandare: Înlocuiți cu un nou kit de izolare a ARN total animal pentru experimente conexe.
5. Tuburile de centrifugă, vârfurile etc. utilizate în manipularea ARN-ului sunt contaminate cu RNază.
Recomandare: Confirmați că tuburile de centrifugă, vârfurile, pipetele etc. utilizate în extracția ARN sunt toate fără RNază.
ARN-ul obținut purificat afectează experimentele din aval
ARN purificat prin coloana de purificare, în cazul în care ionii de sare, conținutul de proteine este prea mare va afecta experimentul din aval, cum ar fi: transcrierea inversă,Northern Blot și colab.
1. ARN-ul eluat are resturi de ioni de sare.
Recomandare: Confirmați că a fost adăugat volumul corect de etanol în tamponul RW2 și efectuați 2 spălări pe coloana de purificare la viteza centrifugă indicată pentru funcționare;dacă există reziduuri de ioni de sare, lăsați coloana de purificare în tamponul RW2 timp de 5 minute la temperatura camerei și efectuați centrifugarea pentru a maximiza îndepărtarea contaminării cu sare.
2. Rezidu de etanol în ARN eluat.
Recomandare: Confirmați că după spălarea tamponului RW2, efectuați operațiunea de centrifugare a tubului gol la viteza de centrifugare indicată pentru funcționare, măriți timpul operațiunii de centrifugare a tubului gol la 2 minute dacă mai există reziduuri de etanol sau lăsați-l la temperatura camerei timp de 5 m
