Kit Cell Direct RT qPCR — SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready Kit qRT-PCR într-un singur pas
Descrieri
Acest kit folosește un sistem unic de tampon de liză care poate elibera rapid ARN din probele de celule cultivate pentru reacțiile RT-qPCR, eliminând astfel procesul de purificare a ARN laborios și consumator de timp.Șablonul ARN poate fi obținut în doar 7 minute.Cele 5×Direct RT Mix și 2×Reactivii directi qPCR Mix-SYBR furnizați de kit pot obține rapid și eficient rezultate cantitative PCR în timp real.
5×Direct RT Mix și 2×Direct qPCR Mix-SYBR are o toleranță puternică la inhibitori, iar lizatul probelor poate fi utilizat ca șablon pentru RT-qPCR direct.Acest kit conține transcriptaza inversă Foregene de înaltă afinitate ARN și polimerază Hot D-Taq ADN, dNTPs, MgCl2, tampon de reacție, optimizator și stabilizator PCR.
Specificații
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Componentele trusei
| Partea I | Tampon CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Tampon ST | |
| Partea a II-a | Eraser ADN |
| Mix 5× Direct RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50× Colorant de referință ROX | |
| DdH2O fără RNază | |
| Instrucțiuni | |
Caracteristici și avantaje
■Simplu și eficient: cu tehnologia Cell Direct RT, probele de ARN pot fi obținute în doar 7 minute.
■ Cererea de mostre este mică, pot fi testate până la 10 celule.
■ Debit mare: poate detecta rapid ARN-ul în celulele cultivate în plăci cu 384, 96, 24, 12, 6 godeuri.
■ ADN Eraser poate elimina rapid genomurile eliberate, reduce foarte mult impactul asupra rezultatelor experimentale ulterioare.
■ Sistemul optimizat RT și qPCR face ca transcripția inversă RT-PCR în două etape să fie mai eficientă și PCR mai specifică și mai rezistentă la inhibitorii de reacție RT-qPCR.
Aplicare kit
Domeniul de aplicare: celule cultivate.
- ARN eliberat prin liza probei: aplicabil numai modelului RT-qPCR al acestui kit.
- Trusa poate fi utilizată în următoarele scopuri: analiza expresiei genelor, verificarea efectului de tăcere a genelor mediat de siRNA, screening-ul de medicamente etc.
Diagramă
Depozitare și termen de valabilitate
Partea I a acestui kit trebuie depozitată la 4℃;Partea II trebuie depozitată la -20℃.
Foregene Protease Plus II trebuie păstrat la 4℃, nu înghețați la -20℃.
Reactivul 2×Direct qPCR Mix-SYBR trebuie păstrat la -20℃in intuneric;dacă este folosit frecvent, poate fi păstrat și la 4℃ pentru depozitare pe termen scurt (utilizare în 10 zile).
Principii de proiectare a primerului PCR în timp real
Grund direct și Grund invers
Pentru PCR în timp real, designul primerului este foarte important.Primerii sunt legați de specificitatea și eficiența amplificării prin PCR și pot fi proiectați cu referire la următoarele principii:
Lungimea grundului: 18-30 bp.
Conținut GC: 40-60%.
Valoarea Tm: Software-ul de proiectare a grundului, cum ar fi Primer 5, poate da valoarea Tm a grundului.Valorile Tm ale primerilor din amonte și din aval ar trebui să fie cât mai apropiate posibil.Se poate folosi și formula de calcul Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Când se efectuează PCR, o temperatură sub valoarea amorsului Tm de 5 °C este în general selectată ca temperatură de recoacere (creșterea corespunzătoare a temperaturii de recoacere poate crește specificitatea reacției PCR).
Primeri și produse PCR:
Lungimea produsului de amplificare PCR a primerului de proiectare este de preferință 100-150 bp.
Amorsele de proiectare din zona structurală secundară a șablonului trebuie evitate pe cât posibil.
Evitați formarea a 2 sau mai multe baze complementare între capetele 3′ ale primerilor din amonte și din aval.
Primer 3′ baza terminală nu poate fi prezentă cu 3 G sau C consecutive suplimentare.
Primerii în sine nu pot avea structuri complementare, altfel se va forma o structură în ac de păr, care afectează amplificarea PCR.
ATCG trebuie distribuit cât mai uniform posibil în secvența primerului, iar baza terminală 3′ ar trebui evitată ca T.
Anexa 1: Pachet de suplimente pentru componente ale Kitului Cell Direct RT-qPCR
1.Soluție de liză celulară
|
| |||
| Componentele trusei (sistem de liză cu 24 de godeuri/godeu) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Parteeu | Tampon CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Tampon ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ParteII | Eraser ADN | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
|
| |
| Componentele trusei (sistem de reacție 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| Mix 5× Direct RT | 800 μl |
| DdH fără RNază2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Componentele trusei (sistem de reacție 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× Colorant de referință ROX | 40 μl | 200 μl |
| DdH fără RNază2O | 1,7 ml | 10 ml |
Manuale de instructiuni:
