Kit Cell Direct RT qPCR—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready Kit qRT-PCR într-un singur pas Sondă
Descrieri
Acest produs folosește un sistem tampon de liză unic pentru a elibera rapid ARN din probele de celule cultivate pentru reacțiile RT-qPCR, eliminând procesul de purificare a ARN laborios și consumator de timp și doar 7 minute pentru a obține șablonul ARN necesar, cu amestecul Direct RT 5×, 2× Direct qPCR Mix-Taqman furnizat de kit poate obține rapid și eficient rezultate PCR în timp real și cantitativ.
5× Direct RT Mix și 2× Direct qPCR Mix-Taqman au o toleranță puternică la inhibitori și pot efectua inversare eficientă și amplificare specifică folosind lizatul probei care urmează să fie măsurat ca șablon.Reactivul conține Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer and Stabilizer, care poate fi folosit cu tampon de liză pentru a detecta rapid și ușor probele și are caracteristicile de înaltă sensibilitate, specificitate și stabilitate.
Specificații
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Componentele trusei
| QuickEasyTMKit RT-qPCR Cell Direct-Taqman | ||||
| Componentele trusei Sistem de reacție qPCR 20μl | DRT-01021 | DRT-01022 | Notă | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Parte I | Tampon CL | 4 ml | 20 ml | Liza celulară |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Tampon ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Parte II | Eraser ADN | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20 × Colorant de referință ROX | 40 μl | 200 μl | ||
| DdH fără RNază2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Manual de instructiuni | 1 bucata | 1 bucata | ||
*:Liza celulară, 5×Direct RT Mix, 2×Direct qPCR Mix-Taqman pot fi achiziționate separat
Caracteristici și avantaje
■Simplu și eficient: cu tehnologia Cell Direct RT, probele de ARN pot fi obținute în doar 7 minute.
■ Cererea de mostre este mică, pot fi testate până la 10 celule.
■ Debit mare: poate detecta rapid ARN-ul în celulele cultivate în plăci cu 384, 96, 24, 12, 6 godeuri.
■ ADN Eraser poate elimina rapid genomurile eliberate, reduce foarte mult impactul asupra rezultatelor experimentale ulterioare.
■ Sistemul optimizat RT și qPCR face ca transcripția inversă RT-PCR în două etape să fie mai eficientă și PCR mai specifică și mai rezistentă la inhibitorii de reacție RT-qPCR.
Aplicare kit
Domeniul de aplicare: celule cultivate.
- ARN eliberat prin liza probei: aplicabil numai modelului RT-qPCR al acestui kit.
- Trusa poate fi utilizată în următoarele scopuri: analiza expresiei genelor, verificarea efectului de tăcere a genelor mediat de siRNA, screening-ul de medicamente etc.
Depozitare și termen de valabilitate
Partea I a acestui kit trebuie păstrată la 4℃;Partea II trebuie depozitată la -20℃.
Foregene Protease Plus II trebuie păstrat la 4℃, nu înghețați la -20℃.
Reactivul 2×Direct qPCR Mix-Taqman trebuie păstrat la -20℃in intuneric;dacă este folosit frecvent, poate fi păstrat și la 4℃ pentru depozitare pe termen scurt (utilizare în 10 zile).
Principii de proiectare a primerului PCR în timp real
Grund direct și Grund invers
Pentru PCR în timp real, designul primerului este foarte important.Primerii sunt legați de specificitatea și eficiența amplificării prin PCR și pot fi proiectați cu referire la următoarele principii:
- Lungimea grundului: 18-30 bp.
- Conținut GC: 40-60%.
- Valoarea Tm: Software-ul de proiectare a grundului, cum ar fi Primer 5, poate da valoarea Tm a grundului.Valorile Tm ale primerilor din amonte și din aval ar trebui să fie cât mai apropiate posibil.Se poate folosi și formula de calcul Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Când se efectuează PCR, o temperatură sub valoarea amorsului Tm de 5 °C este în general selectată ca temperatură de recoacere (creșterea corespunzătoare a temperaturii de recoacere poate crește specificitatea reacției PCR).
- Primeri și produse PCR:
- Lungimea produsului de amplificare PCR a primerului de proiectare este de preferință 100-150 bp.
- Amorsele de proiectare din zona structurală secundară a șablonului trebuie evitate pe cât posibil.
- Evitați formarea a 2 sau mai multe baze complementare între capetele 3′ ale primerilor din amonte și din aval.
- Primer 3′ baza terminală nu poate fi prezentă cu 3 G sau C consecutive suplimentare.
- Primerii în sine nu pot avea structuri complementare, altfel se va forma o structură în ac de păr, care afectează amplificarea PCR.
- ATCG trebuie distribuit cât mai uniform posibil în secvența primerului, iar baza terminală 3′ ar trebui evitată ca T.
Apendice1: Cell DirectRT-qPCR Componenta kitt pachet de suplimente
1. Soluție de liză celulară
| Soluție de liză celulară | |||
| Componentele trusei (sistem de liză cu 24 de godeuri/godeu) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Parteeu | Tampon CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Tampon ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ParteII | Eraser ADN | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Componentele trusei (sistem de reacție 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| Mix 5× Direct RT | 800 μl |
| DdH fără RNază2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Componentele trusei (sistem de reacție 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× Colorant de referință ROX | 40 μl | 200 μl |
| DdH fără RNază2O | 1,7 ml | 10 ml |
Manuale de instructiuni:
