Kit (96 de godeuri) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR – SYBR Green I
Descrieri
The(96 de godeuri) QuickEasyTM Kit Cell Direct RT-qPCR–SYBR Green Iprevedeun sistem tampon de liză unicto eliberează rapid ARNdin celule de culturăprobe pentru reacțiile RT-qPCR, eliminând timp și laboriosProcesul de purificare a ARN și durează doar 7 minute pentru a obține șablonul de ARN necesar.TheMix 5× Direct RTși2× Direct qPCR Mix-SYBRfurnizate în cutie poate rapid șiobține efectiv cantitative în timp realRezultate PCR.
5× Direct RT Mix și 2× Direct qPCR Mix-SYBR au o toleranță puternică la inhibitori și pot folosi lizatul probei care urmează să fie testată ca șablon pentru transcripție inversă eficientă și amplificare specifică.Reactivul conține Reverse Transcriptază unică Foregene cu afinitate mare pentru ARN, precum și Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , tampon de reacție, optimizator și stabilizator PCR și poate fi utilizat împreună cu tamponul de liză pentru a detecta proba rapid, ușor și precis și are caracteristicile de sensibilitate ridicată, specificitate puternică și stabilitate bună.
Trusa vizează liza micro-sistemului de celule cultivate cu 96 de godeuri și are o uniformitate și consistență bună;componentele kitului oferă 96 de reacții de liză, 96 de reacții de transcripție inversă și 96 × 2 reacții qPCR, care pot întâlni placa de celule cu 96 de godeuri pentru o singură utilizare, evitând poluarea cauzată de deschiderea repetată, înghețarea și dezghețarea reactivilor și degradarea performanței reactivului.
Componentele trusei
| Compoziția trusei ( 50 μL sistem de liză/20 μLRT sistem de reacție /20μL sistem de reacție qPCR) | DRT-03011 | Observație | |
| 96T | |||
| ParteI | TamponCL | 5 ml | CelulăLiza |
| ForegeneProteaza Plus II | 100 μL | ||
| TamponST | 500 μL | ||
| Parte II | ADNRadieră | 100 μL | |
| Mix 5× Direct RT | 400 μL | RT | |
| 2× Mix qPCR direct-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× Colorant de referință ROX | 400µL | ||
| RNază- GratuitddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Manual | 1 bucată | 1 portie | |
*: Eraserul ADN cu reactiv de liză este inclus în partea a II-a a trusei;Componentele de liză celulară, RT și qPCR pot fi achiziționate separat.
Caracteristici și avantaje
■Simplu și eficient: cu tehnologia Cell Direct RT, probele de ARN pot fi obținute în doar 7 minute.
■ Cererea de mostre este mică, pot fi testate până la 10 celule.
■ Debit mare: poate detecta rapid ARN-ul în celulele cultivate în plăci cu 384, 96, 24, 12, 6 godeuri.
■ ADN Eraser poate elimina rapid genomurile eliberate, reduce foarte mult impactul asupra rezultatelor experimentale ulterioare.
■ Sistemul optimizat RT și qPCR face ca transcripția inversă RT-PCR în două etape să fie mai eficientă și PCR mai specifică și mai rezistentă la inhibitorii de reacție RT-qPCR.
Aplicare kit
Domeniul de aplicare: celule cultivate.
- ARN eliberat prin liza probei: aplicabil numai modelului RT-qPCR al acestui kit.
- Trusa poate fi utilizată în următoarele scopuri: analiza expresiei genelor, verificarea efectului de tăcere a genelor mediat de siRNA, screening-ul de medicamente etc.
Depozitare și termen de valabilitate
Partea I a acestui kit trebuie păstrată la 4℃;Partea II trebuie depozitată la -20℃.
Foregene Protease Plus II trebuie păstrat la 4℃, nu înghețați la -20℃.
Reactivul 2×Direct qPCR Mix-Taqman trebuie păstrat la -20℃in intuneric;dacă este folosit frecvent, poate fi păstrat și la 4℃ pentru depozitare pe termen scurt (utilizare în 10 zile).
Principii de proiectare a primerului PCR în timp real
Grund direct și Grund invers
Pentru PCR în timp real, designul primerului este foarte important.Primerii sunt legați de specificitatea și eficiența amplificării prin PCR și pot fi proiectați cu referire la următoarele principii:
- Lungimea grundului: 18-30 bp.
- Conținut GC: 40-60%.
- Valoarea Tm: Software-ul de proiectare a grundului, cum ar fi Primer 5, poate da valoarea Tm a grundului.Valorile Tm ale primerilor din amonte și din aval ar trebui să fie cât mai apropiate posibil.Se poate folosi și formula de calcul Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Când se efectuează PCR, o temperatură sub valoarea amorsului Tm de 5 °C este în general selectată ca temperatură de recoacere (creșterea corespunzătoare a temperaturii de recoacere poate crește specificitatea reacției PCR).
- Primeri și produse PCR:
- Lungimea produsului de amplificare PCR a primerului de proiectare este de preferință 100-150 bp.
- Amorsele de proiectare din zona structurală secundară a șablonului trebuie evitate pe cât posibil.
- Evitați formarea a 2 sau mai multe baze complementare între capetele 3′ ale primerilor din amonte și din aval.
- Primer 3′ baza terminală nu poate fi prezentă cu 3 G sau C consecutive suplimentare.
- Primerii în sine nu pot avea structuri complementare, altfel se va forma o structură în ac de păr, care afectează amplificarea PCR.
- ATCG trebuie distribuit cât mai uniform posibil în secvența primerului, iar baza terminală 3′ ar trebui evitată ca T.
Apendice1: Cell DirectRT-qPCR Componenta kitt pachet de suplimente
1. Soluție de liză celulară
| Soluție de liză celulară | |||
| Componentele trusei (sistem de liză cu 24 de godeuri/godeu) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Parteeu | Tampon CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Tampon ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ParteII | Eraser ADN | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Componentele trusei (sistem de reacție 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| Mix 5× Direct RT | 800 μl |
| DdH fără RNază2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Componentele trusei (sistem de reacție 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× Colorant de referință ROX | 40 μl | 200 μl |
| DdH fără RNază2O | 1,7 ml | 10 ml |
Manuale de instructiuni:
