Kit de izolare a ADN-ului pentru tampoane bucale/card FTA Kit de extracție sau purificare a ADN-ului genomic din tampoane bucale
Descriere kit:
Purifică rapid ADN-ul genomic de înaltă calitate din probe de tampon bucal/FTA Card.
◮Fără contaminare cu RNază:Coloana ADN-Only furnizată de kit face posibilă îndepărtarea ARN-ului din ADN-ul genomic fără a adăuga RNază în timpul experimentului, prevenind contaminarea laboratorului cu RNază exogenă.
◮Viteza rapida:Foregene Proteaza are o activitate mai mare decât proteazele similare și digeră rapid probele de țesut;operația este simplă, iar operațiunea de extracție a ADN-ului genomic poate fi finalizată în 20-80 de minute.
◮Convenabil:Centrifugarea se efectuează la temperatura camerei și nu este nevoie de centrifugare la temperatură joasă de 4°C sau de precipitare a ADN-ului cu etanol.
◮Siguranță:Nu este necesară extracția cu reactiv organic.
◮Calitate superioară:ADN-ul genomic extras are fragmente mari, fără ARN, fără RNază și conținut extrem de scăzut de ioni, care poate îndeplini cerințele diferitelor experimente.
◮Sistem de micro-eluție:Poate crește concentrația de ADN genomic, ceea ce este convenabil pentru detectarea sau experimentul în aval.
Descriere
Acest kit oferă o metodă eficientă și rapidă de a obține ADN genomic de mare concentrație din tampoane bucale și FTA Card (pete de sânge).Folosind compania noastră'Coloana și formula unică de rotație cu membrană de silice numai cu ADN, combinate cu Foregene Protease, ADN-ul genomic de înaltă concentrație și de înaltă calitate poate fi extras în 80 de minute.Coloana mică de purificare special concepută leagă ADN-ul genomic, iar ADN-ul poate fi eluat cu o cantitate mică (15μl) sistem de eluare pentru a crește concentrația ADN-ului genomic obținut, care este convenabil pentru detectarea sau experimentul în aval.Kitul poate procesa una sau mai multe probe simultan, iar procesul de purificare nu necesită extracția de substanțe organice, cum ar fi fenolul, cloroformul și precipitarea de izopropanol sau etanol care necesită timp, iar operațiunea este simplă și economisește timp.
Specificații
50 de pregătiri
Componentele trusei
| Tampon ST1 |
| Tampon ST2 |
| Acrilamidă liniară |
| Buffer PW |
| Tampon WB |
| Tampon EB |
| Proteaza anterioară |
| Coloana numai ADN |
| Instrucțiuni |
Caracteristici și avantaje
-Fără contaminare cu RNază: Coloana ADN-Only furnizată de kit face posibilă îndepărtarea ARN din ADN-ul genomic fără a adăuga RNază în timpul experimentului, evitând contaminarea laboratorului cu RNază exogenă.
-Viteză rapidă: Foregene Protease are activitate mai mare decât proteazele similare, digeră rapid probele;operare simplă.
-Convenient: Centrifugarea se efectuează la temperatura camerei și nu este nevoie de centrifugare la temperatură joasă de 4°C sau de precipitare cu etanol a ADN-ului.
-Siguranță: nu este necesară extracția cu reactiv organic.
-Calitate înaltă: ADN-ul genomic extras are fragmente mari, fără ARN, fără RNază și conținut extrem de scăzut de ioni, care poate îndeplini cerințele diferitelor experimente.
-Sistem de micro-eluție: poate crește concentrația de ADN genomic, ceea ce este convenabil pentru detectarea sau experimentul în aval.
Aplicare kit
Este potrivit pentru purificarea ADN-ului genomic din următoarele probe: tampoane bucale, card FTA (pete de sânge).
Depozitare și termen de valabilitate
-Acest kit se poate pastra timp de 12 luni in conditii uscate la temperatura camerei (15-25°C);daca trebuie pastrata o perioada mai lunga de timp, se poate pastra la 2-8°C.
Notă: Dacă este depozitată la temperatură scăzută, soluția este predispusă la precipitații.Înainte de utilizare, asigurați-vă că ați plasat soluția în kit la temperatura camerei pentru o perioadă de timp.Dacă este necesar, preîncălziți-l într-o baie de apă la 37°C timp de 10 minute pentru a dizolva precipitatul și amestecați-l înainte de utilizare.
-Soluția Foregene Protease are o formulă unică, care este activă atunci când este păstrată la temperatura camerei timp îndelungat (3 luni);activitatea si stabilitatea acestuia vor fi mai bune atunci cand se pastreaza la 4°C, de aceea se recomanda pastrarea la 4°C, amintiti-va sa nu o pastrati la -20°C.
Coloana de purificare este înfundată
În acest kit, în operația de extracție a ADN-ului genomic, coloana de purificare este direct adsorbită pe amestecul de liză enzimatică a probei fără pas de centrifugare, iar coloana de purificare poate fi blocată din cauza enzimizării incomplete și a vâscozității ridicate a probei.
Următoarele cauze posibile sunt următoarele:
1. Digestia enzimatică incompletă a probelor de țesut.
Recomandare: Timpul de procesare a probei de Foregene Protease poate fi prelungit în mod corespunzător sau supernatantul poate fi prelevat după centrifugare la 12.000 rpm (~13.400 × g) timp de 5 minute.
2. Utilizarea excesivă a probelor de țesut sau a țesuturilor mari.
Recomandare: Cel mai bine este să nu depășiți 1 tampon bucal în probă;dacă proba este prea mare, creșteți doza de tampon ST1, Foregene Protease, tampon ST2 corespunzător.
3. Vâscozitatea probei este prea mare.
Recomandare: Probele pot fi diluate în mod corespunzător cu 10 mM de Tris-HCl înainte de extracția ADN-ului genomic.
4. Fragmente din cardul de sânge au fost supte.
Recomandare: Timpul de centrifugare tranzitorie al pasului 6 al extracției genomice a spotului de sânge (FTA Card) poate fi prelungit în mod corespunzător.
Randament scăzut sau fără ADN
Există adesea o varietate de factori care afectează randamentul ADN-ului genomic, inclusiv originea probei, condițiile de depozitare a probei, prepararea probei, manipularea etc.
ADN-ul genomic nu poate fi obținut în timpul extracției
Cauzele posibile sunt următoarele:
1. Conservarea necorespunzătoare a probelor sau depozitarea prea mult timp duce la degradarea ADN-ului genomic.
Recomandare: Tampoanele orale ar trebui, de preferință, să fie proaspăt prelevate și nu este recomandabil să se utilizeze tampoane conservate pentru operațiunile de extracție a ADN-ului genomic;probele de pete de sânge trebuie să se asigure că calitatea este calificată și că timpul de depozitare nu trebuie să fie prea lung.
2. Utilizarea prea mică a țesuturilor poate duce la nicio extracție a ADN-ului genomic corespunzător.
Recomandare: Urmați instrucțiunile de prelevare a tamponului bucal din ghidul de operare și ștergeți de cât mai multe ori posibil, astfel încât să poată fi atașate suficiente celule la tamponul oral pentru extracția ADN-ului genomic;pentru extragerea probei de pete de sânge, zona de tăiere a petelor de sânge poate fi mărită în mod corespunzător.
3. Proteaza anterioară este conservată necorespunzător, rezultând o scădere a activității sau inactivarea acesteia.
Recomandare: Confirmați condițiile de depozitare ale Proteazei Foregene sau înlocuiți-o cu o Protează Foregene nouă pentru reacția enzimatică.
4. Conservarea necorespunzătoare a trusei sau timpul de depozitare este prea lung, ducând la defectarea unor componente din kit.
Recomandare: Achiziționați un nou kit de izolare ADN cu tampon bucal pentru procedurile conexe.
5. Tamponul WB nu adaugă etanol absolut.
Recomandare: Confirmați că tamponul WB adaugă volumul corect de etanol absolut.
6. Eluentul nu este adăugat corect pe filmul de silicon.
Recomandare: Adăugați picături de eluent preîncălzit la 65 °C în mijlocul membranei de silicon și lăsați la temperatura camerei timp de 5 minute pentru a crește eficiența de eluare.
ADN genomic cu randament scăzut izolat
Următoarele cauze posibile sunt următoarele:
1. Conservarea necorespunzătoare a probelor sau depozitarea prea mult timp duce la degradarea ADN-ului genomic.
Recomandare: Tampoanele orale sunt de preferință proaspăt prelevate, iar tampoanele conservate nu trebuie utilizate pentru extracția ADN-ului genomic.
2. Dacă cantitatea de probă de țesut este prea mică, conținutul de ADN genomic extras va fi mai mic.
Recomandare: Urmați instrucțiunile de prelevare a probei pe tampon oral din ghidul de operare, ștergând de cât mai multe ori posibil, astfel încât să poată fi atașate suficiente celule la tamponul oral pentru extragerea ADN-ului genomic.
3. Proteaza anterioară este conservată necorespunzător, rezultând o scădere a activității sau inactivarea acesteia.
Recomandare: Confirmați condițiile de depozitare ale Proteazei Foregene sau înlocuiți-o cu o Protează Foregene nouă pentru reacția enzimatică.
4. Probleme cu eluent.
Recomandare: Utilizați tampon EB pentru eluare;dacă se utilizează ddH2O sau alți eluanți, confirmați că pH-ul eluatului este între 7,0-8,5.
5. Eluatul nu este adăugat corect prin picurare.
Recomandare: Adăugați picături de eluent în mijlocul membranei de silicon și lăsați la temperatura camerei timp de 5 minute pentru a crește eficiența de eluare.
6. Lichidul de eluare se acumulează prea puțin.
Recomandare: Utilizați eluent pentru eluarea ADN-ului genomic conform instrucțiunilor, cel puțin nu mai puțin de 15 μl.
Puritate scăzută a ADN-ului genomic izolat
Puritatea scăzută a ADN-ului genomic poate duce la eșec sau la rezultate nesatisfăcătoare ale experimentelor din aval, cum ar fi: enzimele nu pot fi tăiate, PCR nu poate obține fragmentul de genă de interes etc.
Cauzele posibile sunt următoarele:
1. Poluarea cu heteroproteine, poluarea cu ARN.
Analiză: Coloana de purificare nu a fost spălată utilizând tampon PW;coloana de purificare cu spălare Buffer PW nu a fost spălată folosind viteza centrifugă corectă.
Recomandare: Asigurați-vă că nu există precipitare în supernatant înainte de a adăuga etanol;asigurați-vă că spălați coloana de purificare conform instrucțiunilor, iar acest pas nu poate fi omis.
2. Poluarea cu ioni impurități.
Analiză: Coloana de purificare a spălării tampon WB a fost omisă sau spălată o singură dată, rezultând o contaminare ionică reziduală.
Recomandare: Asigurați-vă că spălați Buffer WB de 2 ori conform instrucțiunilor pentru a elimina cât mai mult posibil ionii reziduali.
3. Contaminarea cu enzime ARN.
Analiză: RNazele străine au fost adăugate în tampon;Operația de spălare a tamponului PW a fost incorectă, ducând la reziduuri de RNază, care afectează operațiunile experimentale de ARN din aval, cum ar fi transcripția in vitro.
Recomandare: kiturile de izolare a acidului nucleic din seria Foregene pot elimina ARN-ul fără adăugarea suplimentară de RNază, astfel încât trusa de izolare ADN cu tampon bucal/FTA Card nu trebuie să adauge RNază;asigurați-vă că urmați instrucțiunile pentru coloana de purificare a spălării Buffer PW, iar acest pas nu poate fi omis.
4. Reziduu de etanol.
Analiză: Tamponul WB nu a efectuat centrifugarea tubului gol după spălarea coloanei de purificare.
Recomandare: Efectuați operațiunea corectă de centrifugare a tubului gol conform instrucțiunilor.
5. Alte poluări cu impurități.
Analiză: Probele salvate sau probele speciale nu sunt pretratate.
Recomandare: Pretratați complet proba conform instrucțiunilor.
