Raportul scăzut al A260/A230 este de obicei cauzat de impurități cu lungimea de undă maximă de absorbție la 230 nm.Să vedem ce includ aceste impurități:

• Poluanți comuni	Lungimea de undă de absorbție	Efect de raport
  Proteină	~230nm și 280nm	Reducerea simultană a A260/A 280si A260/A 280rapoarte
  sare de guanidină	220-240 nm	Reduceți A260/A 280raport
  Fenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm și 270nm	Reduceți A260/A 280raport
  EDTA	~230nm	Reduceți A260/A 280raport
  Etanol	230-240 nm	Reduceți A260/A 280raport

 
 
 
Lungimea de undă de absorbție și valoarea de contrast a poluanților obișnuiți

Pcontaminarea cu roteină
Poluarea cu proteine ​​poate fi considerată cea mai comună poluare în procesul de extracție a acidului nucleic.Proteina există între faza apoasă superioară și cea inferioarăorganicfaza .Poluarea va reduce raportul A260/A280 și A260/A230 în același timp, iar raportul A260/A230 se va schimba mai evident decât raportul A260/A280.
În timpul ulterioaretranscriere inversăor Reacții qPCR, reziduurile proteice pot inhiba sau interfera cu funcția enzimatică.Cea mai bună modalitate de a evita contaminarea cu proteine ​​este să țineți cont de principiul „mai degrabă mai puțin decât mai mult, o cantitate mică de multe ori” atunci când aspirați supernatantul.

2. Poluarea cu guanidiniu
clorhidratul (GuHCl) și tiocianatul de guanidină (GTC) au ca efect denaturarea proteinelor, care pot distruge rapid membranele celulare în timpul procesului de extracție a acidului nucleic, provocând denaturarea și precipitarea proteinelor.Lungimea de undă de absorbție a GuHCl și GTC este între 220-240 nm, iarSarea reziduală de guanidiniu va reduce raportul A260/A230.Deși sarea reziduală de guanidiniu va reduce raportul,impactul asupra experimentelor din aval este de fapt neglijabil.

3. Contaminarea cu trizol
Componenta principală a Trizolului este fenolul.Funcția principală a fenolului este de a liza celulele și de a elibera proteine ​​și substanțe de acid nucleic în celule.Deși fenolul poate denatura eficient proteinele, nu poate inhiba complet activitatea RNazei.Prin urmare, la TRIzol se adaugă 8-hidroxichinolină, izotiocianat de guanidină, p-mercaptoetanol etc. pentru a inhiba RNaza endogenă și exogenă.
La extragerea ARN-ului celular, Trizolul poate liza rapid celulele și inhiba nucleaza eliberată din celule, iar Trizolul rezidual va reduce semnificativ raportul A260/A230.
Metoda de prelucrare: La centrifugare, trebuie remarcat faptul că fenolul din Trizol este ușor solubil în faza apoasă în condițiile de 4° și temperatura camerei.

4. Reziduu de etanol
Etanolul este utilizat în procesul final pentru a precipita ADN-ul în timp ce se dizolvă ionii de sare care pot fi legați de ADN.Lungimea de undă de absorbție a celei mai marivârf de absorbție aletanolul este, de asemenea, la 230-240 nm, careva reduce, de asemenea, raportul A260/A230.
Metoda de evitare a reziduului de etanol poate fi repetată de două ori în timpul eluției finale, suflarea înhotătimp de două minute pentru a permite etanolului să se evapore complet înainte de a adăuga tampon pentru eluare.
Cu toate acestea, trebuie știut că raportul este doar un indice de evaluare a calității ARN.Dacă operațiunile menționate mai sus sunt strict reglementate, abaterea dintre raport și intervalul standard nu va avea un impact mare asupra experimentelor din aval.
Produse asemanatoare:
Kit de izolare a ARN total animal
Kit de izolare a ARN total al plantelor
Kit de izolare a ARN total celular
Kit de izolare a ARN total al plantelor Plus