Kit RT-qPCR direct II
Descriere kit:
◮Kitul Direct RT-qPCR, folosind Foreasy Reverse Transcriptase și Foreasy HS Taq DNA Polymerase dezvoltat de Foregene, cu tampon de reacție unic, face acest kit cu rezistență și compatibilitate puternice și poate testa direct reacția folosind sistemul Foregene Lysis ca șablon.Acest kit se poate aplica pentru kit-ul de detectare a acidului nucleic COVID-19 și dezvoltarea kit-ului de detectare a acidului nucleic al altor bacterii patogene.
Descriere
Kitul Direct RT-qPCR oferă tampon RT-qPCR ambalat separat, ADN polimerază Foreasy HS Taq de înaltă eficiențăși Foreasy Reverse Transcriptaza (MMLV),făcându-l convenabil pentru crearea de kituri back-end și ajustarea sistemului, în cadrul unei verificări simple.
Kitul Direct RT-qPCR, folosind Foreasy Reverse Transcriptase și Foreasy HS Taq DNA Polymerase dezvoltat de Foregene, cu tampon de reacție unic, face acest kit cu rezistență și compatibilitate puternice și poate testa direct reacția folosind sistemul Foregene Lysis ca șablon.Acest kit se poate aplica pentru kit-ul de detectare a acidului nucleic COVID-19 și dezvoltarea kit-ului de detectare a acidului nucleic al altor bacterii patogene.
Acest kit poate fi direct componenta produsului IVD, folosindu-se usor si rapid.Are nevoie doar de o verificare ușoară, fără a se dezvolta din nou.
Specificații
500T, 50.000T
Componentele trusei
| Conținutul trusei (sistem de reacție de 20 μL) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Foreasy Rtranscriptază inversă (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml×5 |
| Foreasy HS Taq ADN polimerază (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 ml×10 |
| 2× RT-qPCR directTampon | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Instruire | 1 | 1 |
Etape de operare
A: Pregătiți șablonul și reactivul
1. Pregătiți șablonul de ARN pregătit (Se recomandă utilizarea kit-ului din seria Foregene Total ARN Isolation Kit pentru a extrage și purifica șablonul ARN) sau produsul de cracare a probei (Se recomandă utilizarea sistemului Foregene Lysis), primeri specifici (10 μM) și alte consumabile relevante, instrument.
2. Puneți tamponul direct RT-qPCR 2×, ddH2O fără RNază și 20× colorant de referință ROX (dacă este necesar) în cutia cu gheață, făcându-le să se topească în mod natural și amestecate ușor.
B: Pregătiți sistemul RT-qPCR
Obțineți jumătate din volumul tamponului de reacție al sistemului de reacție (de exemplu, dacă volumul sistemului este de 20 μL, trebuie să obțineți 10 μL 2× tampon direct RT-qPCR). Pentrucantitatea corespunzătoare de enzimă, sugerăm căM-MLV: sistem de reacție 10-30 U/20 μL,TaqADN polimeraza：Sistem de reacție 1-2 U/20 μLaceasta este sugestia noastră, ar trebui să o testați și să o ajustați), se adaugă șablon de ARN, primeri și sonde specifici și se adaugă ddH fără RNază2O până la 20 μL.Prepararea specifică a sistemului de reacție RT-qPCR poate fi referită la următorul tabel 1.
Tabelul 1: Pregătirea sistemului RT-qPCR
| Componentă | Volum | Concentrarea finală |
| 2 × tampon direct RT-qPCR | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptaza (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq ADN polimerază | 1-2 U | |
| Primer direct (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Primer invers (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Sondă (4 μM) | 1 μL | 200 nM |
| Șablon (ARN sau lizat) | X μL | |
| 20× Colorant de referință ROX | - | 1* |
| RNază-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Volum total | 20 μL |
Notă: Primerul direct și Primerul invers sunt primeri specifici genei țintă.Sistemul qPCR ar putea fi ajustat conform modelelor practice experimentale și PCR.Recomandăm 400 nM pentru concentrația finală a majorității primerilor.Ajustați volumul primerilor și sondelor specifice în funcție de concentrația preparată și concentrația finală recomandată, vă rugăm.
1*: Selectați concentrația finală adecvată de colorant de referință ROX în funcție de diferite instrumente cantitative PCR.Concentrația optimă de colorant de referință ROX a instrumentelor PCR cantitative comune este prezentată în tabelul de mai jos:
| Instrumente PCR cantitative | Concentrația finală de colorant de referință ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One,etc. | 1× (de exemplu, adăugați 1μl 20×ROX Reference Dye într-un sistem de reacție de 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P și Mx4000 etc. | 0,5× (de exemplu, adăugați 0,5 μl 20×ROX Reference Dye într-un sistem de reacție de 20 μL) |
| Instrument PCR Roche, instrument PCR Bio-Rad, instrument PCR cantitativ Eppendorf etc. | Fără colorant de referință ROX |
Depozitare și termen de valabilitate
Setul trebuie depozitat la -20 ± 5℃.Trebuie depozitat imediat în frigider termostatic de -20℃.Perioada de valabilitate este de 2 ani dacă este depozitată în stare corespunzătoare.
